蛹虫草菌种培养基

导读：　蛹虫草菌种培养基(共7篇)蛹虫草人工培育技术[农广天地]蛹虫草人工培育技术　　 蛹虫草作为冬虫夏草的保健品生产替代品，广泛用于制药，深受消费者青睐。人工培育蛹虫草，不仅占地少，栽培周期短，而且经济效益好，是农村农民致富的好项目，为我国名贵药材产业化生产开辟了新途径。本期节目分六个培养阶段为您介绍蛹虫草的培育技术。　　 人工培...

篇一 蛹虫草菌种培养基
蛹虫草人工培育技术

　　[农广天地]蛹虫草人工培育技术　　

　　蛹虫草作为冬虫夏草的保健品生产替代品，广泛用于制药，深受消费者青睐。人工培育蛹虫草，不仅占地少，栽培周期短，而且经济效益好，是农村农民致富的好项目，为我国名贵药材产业化生产开辟了新途径。本期节目分六个培养阶段为您介绍蛹虫草的培育技术。　　

　　人工培育蛹虫草时，先将蛹虫草菌接种于培养基上，形成大量的分生孢子，再挑取分生孢子用无菌水制成孢子悬浊液，接种于宿主即蛹体上，保护蛹体直至僵硬。然后将僵硬的蛹体放在模拟蛹虫草自然生态条件下培养，从蚕蛹中长出的子座便同野生蚕蛹长的一模一样。 

　　蛹虫草人工培育技术

　　1 栽培场所　　

　　蛹虫草栽培场所应选择周边清洁，无污染源，通风良好，且水、电、交通方便的最佳位置。厂房应配备合理的原料室、配料室、灭菌室、菌种室、接种室、发菌室、出草室、烘干储藏室等，有利于虫草大规模化生产，使操作人员各负其职，减少或防止虫草污染，提高栽培产量。　　

　　2 栽培季节　　

　　利用自然的气候条件栽培虫草，能节省大量的能源经费，有效提高虫草的经济效益。如湖南省秋、春2季栽培虫草，春季在2月至翌年的4月栽培，秋季在10—12月栽培。大面积建筑地下室、山洞，因气候冬暖夏凉，都是虫草栽培的好地方，夏季地下温度比地上温度平均低10 ℃左右，冬季地下温度比地上温度平均高10 ℃左右。如大规模虫草栽培基地通过人工气候环境调控，可以实现虫草工厂化生产。人工调控环境如安装控温设备，也可实现全年虫草栽培计划。　　

　　3蚕蛹要求

　　1.蚕蛹挑选 采用桑蚕蛹、柞蚕蛹均可。最好使用活鲜蛹，如没有鲜蛹，干蛹也可。无论鲜蛹还是干蛹，均要求大小一致，无任何机械损伤、无杂质、无异味、无霉变的优质蚕蛹。

　　2.蚕蛹消毒处理 采用湿热灭菌法。方法是将洗净后的蚕蛹装入罐头瓶中，大约装至大半瓶，用耐高温的聚丙烯塑料薄膜盖住瓶口，用绳或橡皮筋扎紧，放入高压灭菌锅中灭菌，0.15兆帕保持1.5小时。

　　4床畦要求

　　床栽在室内设多层床架，每层四周用竹片或木板做挡板，床宽60厘米，层距40厘米。床上铺一层薄稻草，其上放5～7厘米厚的培养土（林下沙壤土60%，菜园腐殖土30%，发酵杂木屑10%，pH6.5，含水量50%～60%）。室外畦栽，选择土质疏松、不积水、有水源，能避免人畜进入的场所。畦宽100～120厘米，栽培前在畦底铺6厘米厚的沙壤土或培养土，外搭荫棚。

　　5排蛹接种

　　将桑蚕蛹或柞蚕肾均匀排放在床畦土层上，蛹间距离2厘米左右。将新鲜的液体菌种稀释5～8倍，装入喷雾器内，喷洒蛹体上。为增加感染度，1天内分2次喷。然后，覆沙壤土3～5厘米，上覆地膜或树叶保湿。

　　6蛹虫草栽培方法 

　　6.1配料装瓶与封口　　

　　大米（代料）培养基：东北大米35 g加上述45 mL液体培养基，置500 mL、12 cm高的罐头瓶内摇匀即可，瓶口采用双层带过滤片的聚丙烯塑料封口膜，并用耐高温橡皮筋扎紧。过滤片有利于瓶内外气体交换，促进了虫草子实体快速生长。大米培养基经高温124 ℃，灭菌60 min，自然、冷却、备用。如灭菌时间过短，米饭很干（未熟）难以发菌，在10 d左右，发现瓶内有大量酵母菌产生，并且菌丝渐渐萎缩不明显，导致培养基变质污染。大米与液体培养基的比例十分关键，如液体培养基太多，灭菌后易造成通气性不好，阻止菌丝向下生长，在表面形成较多的气生菌丝，严重影响了虫草的收获产量；太少不利于菌丝生长发育，并且卧放时，瓶内材料易倾向一侧，导致出草不齐，影响虫草的产量。　　

　　6.2 接种培养　　

　　大米培养基接种这个环节很关键，为防止菌种和培养基不受到污染，接种操作须在工作台无菌条件下进行，一般由2个人协同完成，在操作上可达到很好的接种效果。接种液按1∶1用无菌水稀释液体菌种浓度较为理想，如稀释液体菌种浓度高，易造成气生菌丝生长过于旺盛，影响出草产量。接种时用移液枪操作注入，每瓶接种3～5 mL，液体菌种在培养基表面分布越均匀，发菌效果就越好。接入菌种量要适宜。如果接入的菌种过多，培养基内的水分就多，菌丝生长和出草状况不良。如果接入的菌种过少，不能够盖住培养基的表面，发菌的速度不快。总之，要接种适量的菌丝，确保其生长正常。　　

　　6.3菌丝体营养阶段　　

　　1）发菌。发菌在发菌室进行。发菌室要求预先消毒、遮光。前期温度保持在15～18 ℃，相对湿度控制在60%左右；要根据菌丝的生长情况对温度进行适当的调整。当培养基表面布满菌丝时，要适当将温度升高（一般升高至20～22 ℃），升温的时间一般维持15～20 d，就可转入蛹虫草的出草室进行见光培养。发菌先低温可有效抑制杂菌污染，还可使菌丝生长饱满。在接种5～6 d后，及时进行观察，确定菌丝是否接种良好。判断菌丝是否生长良好的标准是观察菌丝的颜色、均匀度、杂菌斑的生长状况、闻培养基的味道。如果菌丝的颜色雪白、生长均匀、无杂菌斑、培养基无异味，则表明其生长状况良好。如发现培养基表面长满较浓密的气生菌丝，在操作处理上既耗时又麻烦，可采取培养基翻转的方法，用无菌镊子在培养基的内壁交界处旋转1圈或几圈，把整块培养基旋松成底朝上，同样可起到较好的发菌效果。　　

　　2）转色及扫菌。在扫菌之前要进行转色。转色是指在适当的光照时间及强度、培养温度等条件下，蛹虫草菌丝由白色变为黄色的过程。一般转色时对光照的强度要求为150～250 lx，光照的时间要求为高于12 h，温度为20～22 ℃，相对湿度为75%，等黄色菌丝呈鱼鳞似的扭结状时，便可扫菌。清除培养基表面的橘黄色菌丝，这样可以遏制气生菌丝的生长而促进蛹虫草菌的生长。扫菌这个环节操作十分关键，在处理上必不可少，是提高蛹虫草产量的有效途径之一。　　

　　3）催芽。催芽的目的促进蛹虫草子实体的生长，保证除草均匀且出草速度快，同时还能够遏制气

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篇二 蛹虫草菌种培养基
如何种植蛹虫草

　　[科技苑]种虫草用上了新虫子(20120213)

　　冬虫夏草是名贵的中草药，随着不断地采挖，野生的已经越来越少了，人工种植一直停留在虫草菇上，也就是利用大米、小麦、蚕蛹等做营养基来培养虫草。之所以很难种出和野生一样的冬虫夏草，除了温湿度等环境很难掌控外，最大的难度就是找适合寄生的虫源。蝙蝠蛾的幼虫是冬虫夏草的寄主，而这种昆虫只能生长在高寒高海拔地区，所以很难人工繁殖，为了找到蝙蝠娥的替代品，专家们开始了漫长的试验过程，现在他们成功地利用蛹虫做寄主，培植出了蛹虫草，它的各种指标都和野生的冬虫夏草不相上下，本片将详细介绍如何种植蛹虫草。

　　 蛹虫草是寄生在多种昆虫蛹体上形成的一种假核。子座一至数枚，从寄主的头部开口处节间缝上长出，其大小因宿主种类和虫体大小而异，一般长1-6厘米，初生时为淡黄色，新鲜时为橘红色，倒苗时为红色，多数为棒状，不分枝。人工培植时，用培养基替代了蛹体。

　　液体菌种的培养基配方为：马铃薯300克（煮汁）、葡萄糖20克、蛋白胨3克、磷酸二氢钾1克、硫酸镁0.5克、水1000毫升。培养基配制完成后，分装于2000毫升三角瓶中，每瓶装800毫升，高压灭菌60分钟，冷却后无菌操作接入母种，置20℃黑暗静止培养48小时，然后置于转速为100圈/分钟摇床上避光振荡培养，温度控制在18℃，待菌液中出现大量的菌丝球后停止振荡，即可用于接种生产或放在冰箱中保存待用。

篇三 蛹虫草菌种培养基
蛹虫草菌种退化机理及预防措施研究进展_何晓红

蛹虫草菌种退化机理及预防措施研究进展

何晓红1

赵欢欢1

刘

飞2

伍晓丽2

孙

全1*

（1重庆邮电大学生物信息学院，重庆400065；2重庆市中药研究院，重庆400065）

摘要蛹虫草作为虫草资源和健康食品，已人工栽培并实现产

业化生产。其菌种在继代培养过程中的频繁退化不仅导致其产量急剧下降，经济损失严重，而且直接影响行业的发展。根据前人的研究，总结、阐述其退化的形态和机理及预防措施，为规范化栽培提供一定的理论基础和指导。关键词蛹虫草

菌种退化机理

预防措施

文章编号

1000-8357（2012）06-0001-02

蛹虫草（Cordycepsmilitaris），子囊菌亚门，麦角菌目，麦角菌科、虫草属的模式种，又名北冬虫夏草、北虫草等。蛹虫草与冬虫夏草同属于真菌门虫草属，但为不同的种。其化学成分和药理作用基本相同，临床上常将蛹虫草作为冬虫夏草的替代品入药。

目前，蛹虫草已经实现人工产业化栽培，是解决野生虫草来源不足的良好途径。但是，在蛹虫草批量生产中，面临的最普遍核心技术难题就是菌种的严重退化。由于菌种退化具有可遗传性，会直接影响菌种质量，造成栽培失败，从而给批量生产带来极大的风险。解决蛹虫草的菌种退化问题已成为国内外学者研究的焦点。笔者在本实验室和前人研究基础上综述了蛹虫草菌种退化的表型和机理，并提出预防措施，以从根本上防止菌种退化，达到保持菌种优良性状的目标。

1菌种退化表型

自然界中生物体发生变异是绝对的。随着生物由低等

向高等进化，这种变异机率越来越小。如果这种变异朝着人们认为是坏的方向发展，就称为退化[1]。

退化的菌株与正常菌株有着明显的区别：退化菌株子实体原基减少，产孢能力大幅度上升或下降，培养周期变长，子实体生长受阻、生长畸形，子实体原基减少，甚至不产生子实体[1]。菌丝体色素减少，白化，甚至没有色素产生。在菌丝生长阶段，退化了的菌丝体见光之后不变色，而正常菌株在见光之后会逐渐变为橘黄色；在显微镜下两者也有明显的不同，退化菌株菌丝纤细、弯曲，孢子粘连在一起呈头状、山丘状，正常菌株菌丝挺立、粗壮，分生孢子呈念珠状[2]。另外，有研究表明退化菌株在脱氢酶活性和在色度培养基中的脱色能力方面，都明显比正常菌株弱[3]。

蛹虫草的子实体能否正常发育理论上来讲由两方面因素来决定：一是菌种的遗传背景因素，二是外界的培养条件[4]。而后者可以通过人为因素改变，使之尽可能地利于

收稿日期：2012-05-09

基金项目：重庆市教委科学技术研究项目（KJ110506）；重庆邮电大学基金项目*通讯作者。

（A2008-04）。

菌株的正常生长。因此，菌种遗传背景因素的改变应该是导致菌种变异的根本原因，即菌种退化的本质是染色体的变异或基因的突变。当然，不良的外界因素也可能通过引起基因突变等而导致菌种的退化。

2菌种退化机理

目前，关于蛹虫草菌种退化的机理研究不是很多，且众

说纷纭，主要有核型的改变、基因的突变、胞内有害物质的积累等等。其中，核型的改变是最多人认同的。2.1

核型的改变

很多学者认为从蛹虫草的异核体和配型

这两个方面进行研究能在遗传物质差异水平上揭示蛹虫草的退化本质。他们通过研究得出论断：蛹虫草退化的原因之一是其菌株的核相发生了改变。

蛹虫草是典型的二极性异宗配合麦角科真菌。异宗配合是一种自体不孕的有性生殖方式，即由同一有性孢子萌发形成的初级菌丝不能独立完成有性生活史，只有通过两个不同交配型的有性孢子萌发生成的初生菌丝之间的交配，才能完成有性生活史。需经过质配、核配、减数分裂等环节后，形成子囊孢子，生长形成子实体[5]。其交配型（MAT1，MAT2）由一对等位基因（MAT1-1，MAT1-2）控制，而基因MAT1-1、MAT1-2分别包含基因MAT1-1-1和MAT1-2-1[6]。

李闽锋采用随机扩增多态性DNA（RAPD）和核糖体

RNA过程中遗传物质改变导致菌种退化。不产子实体单孢子分基因（rDNA）转录间隔区（ITS）序列分析发现准性生殖离株具备的是单一配型，即MAT1-1型或MAT1-2型，而所有能产子实体的菌株都具备MAT1-1和MAT1-2两个配型[7]。

谭琦等人通过PCR方法发现蛹虫草的交配型位点上存在着两类相互不同源的交配型基因，亲本菌株同时含有MAT-HMGMAT1-1-2（MAT1-2-1）和MAT-alpha（MAT1-1-1MAT-HMG）两种类型交配型基因为异核体，退化菌株仅含有和型基因的类型可以鉴定蛹虫草的核相是同核体还是异核体或MAT-alpha一种交配型基因为同核体。由交配[8]。

蛹虫草菌种退化的遗传背景原因就是核相发生了改变，即异核体变成了同核体。2.2

基因的突变

大多数基因突变对生物的生长和发育往

往是不利的，极端突变致死。食用菌细胞分裂周期和世代交替时间都很短，而细胞分裂周期越短，生长越快的物种，在生长时期发生变异的机率越大，变异个体越多，另外加上菌丝继代培养和无性繁殖的无限性，使其在自身生长过程中发生自然突变的可能性远远大于其它高等动植物[9]。蛹虫草整个生长周期为异核细胞，如果其中任一核DNA片段发生不利突

1

变后，传代时核发生分离造成性状多样化，于是菌种出现退化，表现型性状也会随着发生变化。

李美娜等人利用PCR-RFLP和RAPD方法对野生蛹虫草及其退化菌种进行了基因水平的分析，采用了5.8SrRNA和其两端的ITS区，PCR扩增后，用限制性内切酶酶切比较优良菌种及其退化菌种之间酶切结果的差异，发现在5.8S+ITS这个区段，正常菌株与退化菌株至少有两个位点存在着差异，退化菌株在第279和第360个碱基处发生了T到C的转换，发

生了碱基点突变，导致菌株退化[10]，[11]

。

2.3胞内有害物质的积累胞内产生有害物质，当积累到

一定程度，就会毒害细胞、使细胞退化，也可使遗传物质的合成受阻甚至发生突变，最终都会引起菌种的退化。而这些有害物质的产生与积累是由不良环境因子引起的。不良因子存在时，食用菌为了生存，会适应这些不良因子，会使其退回到原始状态或丧失某些优良性状，也会使菌丝细胞不能进行正常的代谢活动，进而产生有害物质，导致基因突变。

研究表明活性氧（ROS）在细胞内的过量积累是丝状真菌退化的重要影响因素之一。熊承慧等将来源于构巢曲霉的谷胱甘肽过氧化物酶基因转化到蛹虫草菌株中进行过量表达，使已退化菌株恢复子实体生长的能力，说明消除胞内活性氧可有效延缓真菌细胞氧化胁迫水平，拯救蛹虫草菌种退化的现象[12]。2.4

菌株无性繁殖体感染病毒

病毒感染菌丝体也可能导

致菌种退化。当病毒在菌丝细胞中无限增殖，就会影响细胞内正常的代谢活动，使菌丝长势下降，表达为菌丝体退化。但是一般情况下，病毒与菌丝细胞处于一种平衡稳定状态，不会出现菌种退化。只有当环境条件发生改变，这种平衡被打破，才会表现出菌种退化的现象。

郑鹏等通过构建smartcDNA文库及高通量表达谱寻找到anti-HIV病毒活性的cvn基因，通过阻止病毒与宿主细胞的结合具有抗病毒特性，蛹虫草中该基因的缺失，导致对蓝光诱导下光周期的异常应答，严重抑制其子实体的发育，致蛹虫草退化[13]。

3

防止菌种退化的方法

3.1

适宜的外界因子

环境因素特别是营养成分会影响真

菌异核体核的配比及异核体的分解。另外，不良的环境因子会导致有害物质的积累而毒害菌种。因此，为了防止异核体的分解和同核体及有害物质的形成，必须选择合适的保藏及培养条件。

3.1.1

合适的保藏条件[14]，[15]

尽量缩短保藏时间不要超过一年）①恒温、低温（2~4℃）保存，

；②在保藏培养基中增加0.5％的琼脂（以防止培养基中的水分大量散发，延长保藏时间）；③用无菌胶塞代替棉塞（既能防止杂菌的污染又能少与试管外的空气接触，避免斜面干燥，减少养分的消耗）。④保藏到期应予以及时转管，或用其它方法继续保藏，否则菌种极易严重退化，造成严重损失。3.1.2

源有麦芽糖、合适的培养条件

葡萄糖、玉米糁汁、液体培养最佳培养基[16]：较好的碳

红糖、甘油、蔗糖等，浓度范

2

围以2%~5%为宜；较好的氮源有蛋白胨、黄豆粉、硝酸铵、蚕蛹、奶粉、酵母提取物，浓度范围以0.11%~0.15%为宜；较好的无机盐有KH0.05%~0.1%，加入2POVB4，MgSO4·7H2O，KH2PO4，ZnCl2，浓度范围1用；最宜的培养温度为和22~28℃2，4-D及橄榄油均对菌丝有促进作

，最适的pH为5.0~7.0，转速120~150固体最佳培养基：r/min，接种量5%~10%较好的碳源有小麦、。

大米、小米、高粱

米混合物；适宜的氮源有蛋白胨[16]、黄豆粉；VBMg12+，Ca2+及植物激素对子实体的生长有促进作用，，2，可作为生4-D，K+，长因子；300~700lx的散射光照；菌丝体培养：温度15~18℃，

湿度65%~70%；子实体培养温度17~25℃，不超过25℃，空气湿度80%~90%，最佳pH范围是5~7。3.2

减少传代次数，防止基因突变

菌种转管次数越多，变

异越大[17]。蛹虫草菌种传代、短期保藏以及菌种扩繁制种一般不超过3代。如果需要长期保藏蛹虫草菌种，则可以采用超低温恒温（0~4℃）、干燥、缺氧等显著降低菌种细胞代谢速度等的保藏方式，尽量缩短传代次数，以确保菌种质量。3.3

及时纯化，必要时进行菌种复壮

如果已经有退化菌

种，就要及时分离纯化，必要时进行菌种复壮。由于在外部形态和生理生化特征上，退化菌株与正常菌株都存在明显差异。因此，可以通过外形来及时分离出正常菌株。目前常用的复壮方法有：3.3.1组织分离法[18]选择优良性状子实体，在无菌条件下用PDA进行组织分离培养，反复筛选至恢复原有性状。

3.3.2

品种性状的接近成熟子实体，孢子分离法[18]选择形态好、生长势健壮并能代表该

悬挂式采孢子于PDA固体培养基上，分离单菌落进行复壮。3.3.3

蛹体内，虫体回接法[18]将菌悬液注射到消毒的刚化蛹的柞蚕

24~25℃培养变成僵蛹。取长满菌丝的体内组织粒到PDA斜面，分离纯化得到复壮菌株。3.3.4挑取健壮菌丝体

顶端部分进行纯化培养复壮。

菌丝体纯化与尖端菌丝体分离法[19]3.3.5与亲和单核菌丝杂交成双核菌丝，有性孢子分离法[19]采用孢子收集器收集有性孢子，

分离优良菌株投产。3.3.6

生素复配的抗生素菌株复壮法[19]活化菌株接种于一种或多种抗

PDA平板培养基上进行反复复壮培养。

另外，可以从生理生化特征上来鉴定并区分。例如：脱

氢酶的活性（正常菌株的酶活性高于退化菌株的活性）[20]，[21]

；溴麝香草酚蓝指示剂法（退化菌株为蓝色或绿色）[22]，提前淘

汰退化菌株，减少损失，解决批量生产的核心技术问题。

综上所述，蛹虫草菌种退化现象的本质是遗传物质的严重改变，其中涉及一系列复杂的生理生化及遗传过程，主要的原因有外部和内部因素。不良的外界因子会引起异核体的分解、同核体的形成、基因突变、病毒感染以及有害代谢产物的积累，从而最终导致菌种的退化。

因此，在蛹虫草的保藏及培养过程中，务必确保最佳的外界条件，尽量防止菌种的退化。对于已出现退化的菌种，要提前鉴定、及时分离、及时复壮，以最大限度地减少大规模生产的损失。

（且每半年活化一次，

蛹虫草中虫草素的研究进展

都兴范

李

军【蛹虫草菌种培养基】

王林美

（辽宁省农业科学院大连生物技术研究所，辽宁大连116024）

摘要虫草素是虫草中特有的活性成分，具有广泛的生物活性

在蛹虫草的培养液中分离得到一种晶体，命名为虫草素[2]。其分子式为C10H13N5O3，分子量为251，碱性，针状或片状结晶，熔点230℃~231℃，溶于水、热乙醇和甲醇，不溶于苯、乙醚和氯仿，蒽酮反应呈阳性，紫外最大吸收波长为259nm[3]。虫草素的结构式见图1。

和显著的药理作用。就近年来蛹虫草中虫草素的理化性质、合成、提取纯化方法及药理作用等方面的研究进展进行综述。关键词文章编号

蛹虫草

虫草素

提取纯化

药理作用

[1]

1000-8357（2012）06-0003-02

蛹虫草[Cordycepsmilitaris（L.）Link]又称北冬虫夏草，是虫草属的模式种，经成分测定分析及药理实验证明可作为冬虫夏草中的替代品之一。蛹虫草中主要活性成分包括虫草素、虫草酸及虫草多糖等，其中，虫草素是虫草中特有的活性成分，由于其具有广泛的生物活性，已引起世界范围内的广泛关注。笔者结合自生的相关研究就近年来有关蛹虫草中虫草素的理化性质、合成、提取纯化方法及药理作用等方面的研究进展情况进行综述。

2

2.1

虫草素的化学合成、提取及纯化方法

虫草素的化学合成方法

涂红艳等对虫草素的化学合

成方法进行了总结，主要包括4种方法：1.以3’-O-对硝基苯磺酰基腺苷为原料的合成方法；2.以叔戊酸-2-羟基-4-戊炔酯为原料的合成方法；3.以6-N-苯甲酰基-5’-叔丁基二甲基硅氧基-2’-，3’-环氧腺苷为原料的合成方法；4.以3’-O-2，4，5-三羟基腺苷为原料的合成方法。其中以第4种合成方法制备虫草素的报道较多[4]。但由于其化学反应过程复杂、反应时间长、产量低，而且合成过程中排放出大量危害人体的有机溶剂，因此，国内外一直致力于以蛹虫草为原料提取纯化虫草素的研究。

图1

HO

NH2NNOOH

虫草素的结构式

NN

1虫草素的理化性质

虫草素即3’-脱氧腺苷（3’-Deoxyadenosine），是一种核

虽然虫草素可以采用化学方法合成，

苷类抗生素，属嘌呤类生物碱。1951年，德国Cunningham等

收稿日期：2012-05-30一稿；2012-09-13修改稿。

基金项目：大连市科技计划项目（2009E11SF130）。联系电话：0411-84790089

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韩日畴，林清泉，丘血红.蛹虫草退化菌种快速鉴定方法：中

3

篇四 蛹虫草菌种培养基
蛹虫草菌种与培养方法相互筛选技术和应用效果

中国食用菌2009，28（1）：18～19

EDIBLEFUNGIOFCHINA

CN53－1054／QISSN1003－8310

蛹虫草菌种与培养方法相互筛选技术和应用效果*

胡事君1，2，张善信1，郑贵朝1**

（1.东莞市生物技术研究所，广东

东莞

523086；2.东莞市农业科学研究中心，广东东莞523086）

摘要：阐述东莞生物技术研究所开展蛹虫草人工培养技术研究过程中，采用的菌种与培养方法相互筛选的技术方案，

即收集大量的菌株，在菌种繁殖和发酵培养技术研究、菌丝有效活性成分检测、子实体栽培试验和子实体有效成分检测等各个技术环节中，分别对各备选菌种和培养方法进行相互筛选。介绍该技术方案在每个环节中的应用效果，并对其优缺点进行探讨。

关键词：蛹虫草；菌种；培养方法；相互筛选中图分类号：S646.9

文献标识码：A

文章编号：1003-8310（2009）01-0018-02

蛹虫草（Cordycepsmilitaris）的人工培育及其产业化研究是国内外所共同关注的课题。日本、韩国、加拿大对蛹虫草的研究非常重视，研究不断深入[1~3]；国内有关的科技人员也已为此做了大量的工作[4~13]。

优良的菌种和有效的培养方法是提高蛹虫草子实体生产效率和产品质量的前提条件。在菌种筛选方面，有关文献已报道了野生菌株的分离和筛选[7]、不同菌株的比较与筛选[8]、不同菌株子实体形成情况和有效成分的分析和对比[9]、原生质体诱变筛选[10]等多种筛选方法，其筛选的依据基本上都是子实体的产量或部分活性成分的含量；而对有关菌种的固体培养、发酵培养以及子实体栽培技术[11~13]等报道的文献比较有限。

本文介绍了我所自2000年起在收集大量蛹虫草菌株、开展菌种筛选和子实体人工栽培技术研究过程中采用的菌种、培养方法相互筛选的技术方案和应用效果，以供参考。各环节的具体研究情况将有相应的文章发表。

养基和若干随机抽取的加富培养基测验各备选菌株的菌丝生长情况，进行菌种的第二轮筛选；用若干随机抽取的菌株作为测验种，根据各加富培养基上多个菌株的菌丝生长速度平均值，筛选最佳的菌种繁殖培养基。

1.2.3菌种的发酵培养阶段

参考繁种培养基配方，设计多种液体发酵培养方案。

随机抽取若干培养方案测验各备选菌株的发酵培养结果，以干菌丝产量为指标，淘汰部分产量较差的菌株；随机抽取若干菌株作为为测验种，对比各发酵培养方案的培养效果，筛选最佳的发酵培养方案；在相同的发酵培养条件下，检测各备选菌株的菌丝中有效活性成分的含量，进一步淘汰菌丝有效活性成分含量较低的菌株。

1.2.4子实体栽培阶段

以大米为基本材料，设计多种不同的培养方案。用随

机抽取的若干菌株作为测验种，对比各培养方案中蛹虫草子实体的形成、生长和产量情况，筛选最佳的培养方案；对比各菌株在相同培养条件下获得的子实体干品产量和子实体中虫草素、虫草酸、腺苷、多糖、氨基酸等有效活性成分的含量，筛选部分高产、优质的菌株作为生产用种。

1

1.1

技术方案

备选菌种

从野生蛹虫草子实体中分离、培养获得35个菌株

（经随机抽样，由东莞市瑞丹生物科技有限公司送中国科学院微生物所鉴定，确认为蛹虫草菌种）和通过购买、受赠、交换等途径引进的112个蛹虫草菌株。

2

2.1

应用效果

菌种的初步筛选

在PDA培养基上，3个随机菌株的菌丝在（24±1）℃

1.2筛选方法

1.2.1菌种的初步处理阶段

从引进的蛹虫草菌种中随机抽取几个菌株，用PDA培养基培养，确定菌种培养温度。将各备选菌株分别接种到PDA培养基上，观察各菌株在相同培养条件下的菌丝生长情况，淘汰个别菌丝萌发较迟、生长缓慢且长势明显较差的菌株。

条件下培养效果最好；147个备选菌株在该培养条件下菌丝生长情况差别很大；根据菌丝萌发和生长情况对菌种进行初步筛选，淘汰15个菌丝萌发较迟、生长缓慢且长势明显较差的菌株，保留132个菌株参与下一阶段的试验。

2.2菌种的繁殖与筛选

观察对比各菌株在PDA培养基和随机抽取的4种加

富培养基上培养后的菌丝浓密程度和菌丝长势，对蛹虫草菌种进行第二轮筛选，淘汰26个在3种以上培养基上菌丝生长比较稀疏菌株，保留106个菌株用于进一步试验。

对比各加富培养基上10个菌株接种后长满平面培养

1.2.2菌种的繁殖阶段【蛹虫草菌种培养基】

分析蚕蛹的主要成分及含量将其作为参考，以PDA

培养基为基础，设计多种不同的加富培养基。用PDA培

*项目来源：广东省“三高”农业科技项目粤财农[2006]43号和东莞市科技计划项目东科[2004]53号部分研究内容。作者简介：胡事君（1966－），男，硕士，高级农艺师，从事农业科学研究。E-mail：shj_hu@163.com

**通讯作者：郑贵朝（1974－），男，硕士，高级农艺师，从事农业生物技术研究。E-mail：guizhao@139.com收稿日期：2008-11-05

第28卷第1期胡事君等：蛹虫草菌种与培养方法相互筛选技术和应用效果19

基所需时间的平均值，筛选出最适合用于蛹虫草菌种繁殖的培养基，即PDA、蛋白胨3.00g·L-1、鸡蛋15.00g·L-1、KH2PO41.00g·L-1、MgSO41.00g·L-1、复合维生素0.04g·L-1，

pH自然（实测值为6.0左右）。2.3菌种的发酵培养与筛选

从正交设计的25种培养方案中随机抽取5种培养方案，分别对各备选菌株进行培养，对比各菌株的菌丝产量，淘汰了27个菌丝产量明显比较低的菌株。

从保留的79个较好的菌株中随机抽取3菌株作为测验种，以培养后3个菌株的菌丝产量平均值为指标，对比和分析各发酵培养方案的培养效果，筛选出最佳的发酵培养基，即马铃薯200g·L-1、KH2PO41.00g·L-1、MgSO40.50

g·L-1、复合维生素0.04g·L-1、蛋白胨5.00g·L-1、葡萄糖12.50g·L-1、蔗糖10.00g·L-1，pH值7.0、摇床速度为120r·min-1、培养温度23℃（B26号），采用此方案发酵培养168h后菌丝干重达到最大值。

各菌株用以上最佳发酵培养方案培养后，分析菌丝中虫草素和虫草酸活性成分含量，根据分析结果，淘汰45个活性成分含量较低菌株，保留32个菌株进行栽培试验。

2.4子实体栽培试验及菌种的筛选

以若干菌株为试验材料，对比各培养方案中蛹虫草子

实体的形成、生长和产量情况，发现最佳的高产培养方案和优质培养方案并不一致。其中最佳培养基配方方案，即江苏大米22g、营养液用量30mL（鸡蛋30.0g·L-1、

KH2PO43.0g·L-1，pH值6.5），培养温度22℃，前期暗培养4d后，改为24h光照培养，夜间培养温度降低2℃，直到子实体原基分化完毕后。每天提供8h～10h光照条件，瓶外湿度控制80％以上。

对比各菌株在相同培养条件下获得的子实体干品产量和子实体中虫草素、虫草酸、腺苷、多糖、氨基酸等有效

图1

典型的高产、优质菌株

图2

蛹虫草子实体的规模化生产

活性成分含量，筛选出11个高产（直径5.5cm、高度

10.8cm罐头瓶中子实体干重≥2.0g）、优质（干子实体中

虫草素≥0.15%、虫草酸≥5.0%、腺苷≥0.15%、多糖≥6.0%、氨基酸总和≥14%）菌株作为生产用种（图1、图2）。

3结论和讨论

对收集到的147个菌株进行多重筛选，优点在于备选

菌株数量比较多且不具备成熟的蛹虫草菌种、子实体培养技术的情况下，在菌种的分离及培养、繁殖、发酵培养、菌丝有效成分检测、子实体栽培试验和子实体有效成分检测的研究过程中能逐步完成菌种的筛选，在较短的时间内实现了规模化生产。该方案可为蛹虫草及其它食用、药用真菌的开发利用提供参考。

在实际生产中，菌种的筛选不一定需要经过以上所有的程序，如果有了现成的菌种繁殖和子实体栽培技术，可以直接从所有备选菌株中抽样试种，对比各备选菌株的菌种发酵培养能力、子实体产量和子实体有效成分含量即可，但如果备选菌株比较多的话，菌种筛选的工作量会比较大，我们还是建议采取多重筛选的方法，可提高在蛹虫草高产、优质菌种的筛选和菌种、子实体培养技术方面的研究进度，而且筛选出的菌种具有较好的适应性，培养方法也具有较好的代表性。

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篇五 蛹虫草菌种培养基
蛹虫草常用菌种选育技术

篇六 蛹虫草菌种培养基
蛹虫草菌种复壮技术的研究

食用菌　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　EDIBLE　FUNGI　　　　　　　　　　　　　　　　　　　2006(2)

蛹虫草菌种复壮技术的研究

李亚洁　王　鹤　孟　楠　石理鑫　王林华

(辽宁省农科院大连生物技术研究所,116024)

及培养条件:培养基配方:1000mL培养基中土豆200g,蔗糖

30g,硫酸镁1.5g,磷酸二氢钾3g,VB11mg。最后调pH为6～6.5(固体培养基加2%的琼脂粉即可)。土豆:去皮后称200g,

切小块,煮开后继续煮0.5h,4～5层纱布过滤,高压灭菌30

min。培养条件:24～25℃静止培养2d后,120r/min,培养5d。1.2　试验方法

1.2.1　组织分离法　选无杂菌的罐头瓶中长度2～3cm状态

文章编号　1000-8357(2006)02-0018-02

我所经过多年研究,人工驯化栽培蛹虫草获得成功,并实现了规模化生产。但在生产实践中,我们遇到了一个普遍性的难题,就是蛹虫草菌种的遗传变异显著,优良性状不能完全稳定遗传,且极易老化或退化。一般来说,从野生蛹虫草菌株中分离的一个较好菌株,幸运的话可能会使用1～2年,保持优质高产。但通常是使用半年左右,甚至是传种几代后菌种就严重退化,表现特征是不长或只长出极少量子实体,而且质量极差,给批量栽培带来极大的风险。为了降低这种因菌种退化而带来的风险,我们在菌种复壮方面做了大量工作,了适合于蛹虫草菌种复壮的较好方法,同行参考。

好的子实体,用无菌水冲洗,刮掉表层,取肉质1mm大小于斜面培养基上,24～25℃培养15d,菌丝布满斜面,再经子实体栽培,反复筛选,得到菌株cm～B。

1.2.2　孢子分离法　选择形态好、生长势健壮并能代表该品

种性状的接近成熟子实体,悬挂式采孢子于PDA固体培养基上,24～25℃培养成单个菌落,再将单个菌落移到斜面培养基上,继续培养到菌丝布满斜面,反复筛选,cm-2.cm-A接种到液

5层纱布过滤,滤液待用。取刚化,用75%乙醇消毒。用医用注射器将上述菌液注射到蛹体内,24～25℃培养变成僵蛹。取长满菌丝的体内组织粒到PDA斜面,24～25℃条件下继续培养到菌丝布满斜面,再分离纯化得到菌株cm-D。

1.2.4　耐高温试验　将复壮后的新菌株各取1支试管种置34℃恒温箱24h。

1.2.5　菌丝生长试验　将复壮后的新菌株及亲本菌株各取

1　材料与方法

1.1　试验材料　①菌株cm-A,由本实验室提供。②培养基

积投料量大,利用率高,辽宁地区多采用这种栽培方式。排袋前先挖掉接种孔处的老化菌种,以刺激原基分化,但需注意避免接种孔积水。

2.4.2　适时疏蕾　为保证子实体质量,对出菇口处原基分化过

一小块接种到盛有PDA固体培养基的培养皿中央,24～25℃下培养3d开始观察,观察10d后结束试验。

1.2.6　子实体栽培　取cm-A、cm-B、cm-C、cm-D相同

密的原基要适时进行疏蕾,每个出菇口保留2～3个原基为宜。

2.4.3　环境因子调控　韩杏1号菌株原基分化对温度比较

大小、数量的菌块接种到PDA液体培养基中,24～25℃静止培养2d后,120r/min摇床振荡培养5d,接种米饭罐头瓶中,每个测试样30瓶,相同管理条件下培养、观察,计算平均单瓶

产量(鲜重)。

敏感,偏向于恒温结实性。过大的温差不利于菇蕾的发生,出菇期间要掌握较低的环境温度和较高的相对湿度。实践中当菌袋发满菌丝后边排袋边松动袋口(不开口)以增加袋内供氧量,给予300～500lx散射光,每天通风1～2次,保持空气新鲜,控温在18～22℃,控湿在75%～80%,继续培养7～10d,让菌丝充分成熟,再将温度降至12～15℃,增加空气湿度在

85%～95%,每天通风2～3次,诱导原基形成,整个管理过程

2　结果与分析

2.1　耐高温试验　将复壮菌株cm-B、cm-C、cm-D试管菌

丝置34℃恒温箱24h,未发现吐黄水,但生长速度变得缓慢,重新置24℃环境中,恢复了原有的生长速度,说明复壮菌株能耐一定高温。

2.2　菌丝生长情况　cm-B、cm-C、cm-D与亲本cm-A

尽量调控好温、光、水、气关系,切忌热风、干风、强风直吹菇体,造成幼菇发黄萎缩。

出菇管理应注意以下几点:①袋口不可在现原基前打开,以免受袋外大环境温、湿、气不稳定影响,使原基形成受阻或出菇不整齐。②出菇小环境气温达到20℃以上不易现菇蕾,超过22℃将造成萎缩至死,低于8℃不现蕾,温度在13～15℃时出菇快、菇蕾多、生长齐,出菇后控温在13～18℃,成菇后期降温至15℃左右能明显提高产、质量。③催蕾期控湿90%～

95%,幼菇后期控湿80%～90%,防止长期高湿引发病害,管

相比,菌丝日平均生长量都有提高,具体见表1。

表1　菌种复壮前后菌丝生长情况(mm)

菌　株日均生长

cm-A4.12

cm-B5.21

cm-C5.51

cm-D5.84

2.3　子实体栽培试验　三种方法复壮的菌种经子实体栽培

试验,通过观察比较,发现cm-D转色最快,cm-B及cm-C次之。出草天数均提前4～5d,而且子实体比较均匀,且个数多,从而产量也有明显的提高。具体见表2。

理后期稍偏干些,能延长商品的货架寿命。空气湿度在80%以下要适当喷水增湿,切忌把水直接喷于菇体上,以免引起子实体黄化,严重时引起腐烂。④保持良好的通风条件,空气好,菇蕾多,菌盖正常,菇形好,质量好,产量高。

3　讨　论

通过上述试验,可以看出,蛹虫草的菌种复壮采用这三种

—18—

食用菌　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　EDIBLE　FUNGI　　　　　　　　　　　　　　　　　　　2006(2)

表2　菌种复壮前后子实体栽培情况

菌　株

转　色出草天数(d)产量(g/瓶)

cm-A

cm-B

cm-C

cm-D

一般

1615.5

快

1020.1

快

1222.3

快

1019.8

冬虫夏草菌液体发酵过程中酶活性的测定与分析

王英超1　李天俊2　任　健

(天津农学院生化实验室,300384)

方法均是可行的。但因蛹虫草菌种要求外界条件严格,受外界因素影响明显,仅以常规方法进行复壮,还不能真正解决菌种退化问题。目前,研究发现组织细胞产生的脱氢酶与细胞活力成正比,通过对脱氢酶的测定来提早淘汰退化菌株,减少损失。下一步我们主要从遗传物质DNA入手,通过分子标记技术RFLP和RAPA。比较正常菌株和退化菌株在基因水平的变异情况,利用电泳图谱观察与退化特征相联系的特异条带,确定突变基因,想办法“治疗”发生变异的基因,最终找到一种很好的解决菌种退化问题的办法。

参　考　文　献

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(3)5～6

摘　要　采用不同培养基人工培养冬虫夏草,并对其在发酵不同阶段低温活性物质———淀粉酶、糖化酶、中性及酸性蛋白酶的活力进行测定和分析。结果表明:①淀粉酶、糖化酶、中性及酸性蛋白酶的活力均随反应时间的延长而逐渐增加;②发酵12～

54h,培养基Ⅱ中的淀粉酶、糖化酶、中性及酸性蛋白酶活力显

著高于培养基Ⅰ;③发酵54～72h,培养基Ⅱ中的淀粉酶、糖化酶的活力仍然高于培养基Ⅰ,Ⅱ中的中性、酸性蛋白酶　酶活性　-)02-0019-03

冬虫夏草(Coudycepssinensis(Berkely)Sacc.)是一种典型的耐冷微生物。其营养成分丰富,含有17～19种氨基酸,多种肽类及多种活性物质,对增强人体免疫力,抗肿瘤,延缓衰老等均非常有效,是一种药用食用的珍品[1]。近年来,由于发酵技术水平的飞速发展和提高,很多原来稀少的天然菌种也可用于大型发酵培养从而大批生产。冬虫夏草低温发酵产生淀粉酶、糖化酶、中性及酸性蛋白酶等低温活性物质,这些低温活性物质广泛用于洗涤添加剂、食品工业等[2]。本研究采用不同培养基人工培养冬虫夏草,并对其在发酵不同阶段低温活性物质———淀粉酶、糖化酶、中性及酸性蛋白酶的活力进行测定和分析。

　▲免费供种信息　辽宁省食用菌技术开发基地,已筛选出一

批优良的食用菌高产品种,现向各地免费提供试种,主要的品种有:香菇、平菇、滑菇、黑木耳、金针菇、白灵菇、杏鲍菇、鸡腿菇、姬菇、榆黄蘑、榆耳、茶薪菇、姬松茸、大球盖菇、灵芝、北冬虫夏草等,每个品种限供2支,只收邮寄费5元,4支起邮。引种请寄:沈阳市苏家屯区城郊,辽宁食用菌技术开发有限公司　财务部收,请注明求赠菌种字样。邮编:110115,电话:024-89429646、89429364、89429923,89429936,联系人:刘老师、张老师、李老师。　▲欢迎邮购《中华仙草・灵芝》　这是一本谈古论今的灵芝专著,由中国教育文化出版社出版。全书30余万字(16开本),共分13章:1.中国的灵芝文化;2.灵芝的分类与资源;3.灵芝的形态结构;4.灵芝的生理特性;5.灵芝的有效成分;6.灵芝的药理作用;7.灵芝的临床应用;8.灵芝的精华孢子粉;9.灵芝子实体的培育;10.灵芝的深层培养;11.灵芝有效成分提取及产品加工;12.灵芝的药膳和民间验方;13.灵芝盆景造型工艺。正文前有16版彩页,彩照90余幅。内容极其丰富,取材新颖,系统全面,文字通俗易懂,是药用真菌研究者、生产者和灵芝经营者的一本非常实用的工具书。可供农学、药学、医学、中医药学、生物学等专业院校的师生教学参考,也是保健求知者不可多得的一本科普知识读物。定价48元,另加挂号邮资6元,共54元;购5册以上按定价8.5折、10册以上按定价8折优惠,均免收邮资。汇款:上海市中山西路800弄57号紫虹大厦12楼C座张甫安收,邮编200051,电话021-62740569。

1　材料与方法

1.1　菌　种　冬虫夏草菌种,由天津农学院微生物实验室提

供。

1.2　方　法　

1.2.1　斜面母种培养[3,4]　菌种接入斜面母种培养基,18℃

培养7d。

1.2.2　种子培养　100mL种子培养基中用接种铲接入已培

养7d的斜面母种菌丝块适量,置于3个500mL三角瓶中,用旋转式恒温摇床于18℃,200r/min培养72h。

1.2.3　发酵培养　取12个500mL三角瓶,每瓶分别装100mL发酵培养基Ⅰ、Ⅱ(培养基Ⅰ、Ⅱ各做6瓶,发酵培养基Ⅰ

和Ⅱ中含有相同的成分,发酵培养基Ⅱ中额外添加一定量的玉米粉和豆饼粉),每瓶接入种子培养液5mL,200r/min,18℃培养72h,每隔12h取一次样,每次取发酵培养基Ⅰ、Ⅱ发酵菌瓶各一瓶。

1.2.4　发酵液中酶的制备　参考有关文献[5]、[6]、[7]、[8],分别取冬虫夏草发酵液各100mL,4℃4000r/min离心20min。弃沉淀收集上清液,并分别记录其体积,上清液待用,

分别测定其中性和酸性蛋白酶、淀粉酶及糖化酶的活力。

—19—

篇七 蛹虫草菌种培养基
蛹虫草人工培养条件的研究

山东农业大学学报(自然科学版),2011,42(3):345-348JournalofShandongAgriculturalUniversity(NaturalScience)

蛹虫草人工培养条件的研究

谢春芹,赵桂华*,冯大俊,杨鹤同,史 俊,宋子明,孙小慧,韩荣梅

(江苏农林职业技术学院,江苏句容

212400)

摘要:本实验通过对不同培养条件下蛹虫草的出草率及品质的对比,结果表明,菌丝长满料面后温度18 ,湿度90%,光照33%( )条件下出草快且产量高,品质好。关键词:蛹虫草;培养条件;出草率;品质

中图分类号:Q93 文献标识码:A 文章编号:1000-2324(2011)03-0345-04

STUDIESONARTIFICIALCULTURECONDITIONSOFCORDYCEPSMILITARISXIEChun-qin,ZHAOGui-hua*,FENGDa-jun,YANGHe-tong,SHIJun,

SONGZi-ming,SNUXiao-hui,HANRong-mei

(PolytechnicCollegeofAgricultureandForestry,JiangsuJurong212400,China)

Abstract:ThisexperimentunderdifferentcultureconditionsandqualityofCordycepsmilitarisinahastycomparison,theresultsshowthatthematerialsurfacecoveredwithmyceliumafterthetransfertemper-ature18 ,humidity90%,light33%( )fastundertheconditionsofthegrasshighyieldandgoodquality.

Keywords:Cordycepsmilitaris;cultureconditions;arash;quality

虫草是我国名贵的药用真菌,其中最著名的是冬虫夏草(Cordycepssinensis),其次是蛹虫草(Cordycepsmilitaris),又名北冬虫夏草。冬虫夏草因生境特殊、寄主专一,人工培养难度大。与冬虫夏草相比,蛹虫草对环境条件要求不严格,适应性较强,较易进行人工培养。

蛹虫草为子囊菌亚门,麦角菌目,麦角菌科、虫草属的模式种,它既能补肺阴,又能补肾阳,主治肾虚,阳痿遗精,腰膝酸痛,病后虚弱,久咳虚弱,劳咳痰血,自汗盗汗等,是一种能同时平衡、调节阴阳的中药[3]。由于虫草具有很好的医疗保健功能,目前国内外已开发出多种虫草产品(包括药品和保健食品),近年来市场对蛹虫草的需求逐渐增大,对其外观和品质要求也越来越高,但由于蛹虫草对环境的特殊性和敏感性,生产者对蛹虫草培养条件把握不准,蛹虫草的产量和品质已成为蛹虫草大面积生产的瓶颈[4-5]。为此,我们立题开展对蛹虫草培养条件的研究,旨在探索出蛹虫草最佳出草的培养条件,为蛹虫草的大规模生产提供依据。

[1-2]

1材料与方法

1.1 试验材料及来源

蛹虫草菌种由江苏省农业科学院农产品加工研究所提供。1.2 方法1.2.1

蛹虫草液体菌种的制备[6-7] 蛹虫草液体菌种培养基的配方。葡萄糖20g,蛋白胨10g,KH2

PO40.5g,MgSO41g,VB1100 g,水1000mL。 蛹虫草液体菌种培养基的配制。用量筒量取1000mL

收稿日期:2010-12-23

基金项目:江苏省高等学校大学生实践创新训练项目 蛹虫草新品种的引进及配套高产优质栽培技术 项目基金作者简介:谢春芹(1976-),女,汉,江苏沐阳,硕士,讲师,主要从事食用菌新品种选育与病虫害研究工作。*Arm

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水倒入烧杯内,加热至沸腾,加入称量好的10g蛋白胨,边加边搅拌,直至完全溶化,再加入称量好的葡萄糖和其他营养成分(其中VB1需磨碎后再加入),完全溶解后,最后定容至1000mL。将培养基分装到容量为500mL的三角瓶内,每500mL三角瓶装培养基100mL,在121 下高压蒸汽灭菌30~40min。 蛹虫草液体菌种的接种。在超干净工作台内,按无菌操作要求,挑取少许带有培养基的母种菌饼1~2块接种至液体培养基中。 液体菌种的培养。在19 恒温振荡培养箱中,转速120r/h,培养2d后,再在19 恒温培养箱中静止培养,摇瓶3~4次/d,培养2~3d后,当菌丝球布满液体培养基1/3~2/5时,拿出备用。

1.2.2蛹虫草的栽培 蛹虫草栽培培养基配方。大米40g,营养液60mL,蚕蛹粉1g,也可以用小麦代替大米作培养基。营养液配方为蛋白胨8g,葡萄糖12g,MgSO41g,KH2PO41g,柠檬酸1g,VB1粒,水1000mL。 培养基装瓶、灭菌。取50只500mL的广口瓶,在每个广口瓶内分别放入称量好的大米,营养液和蚕蛹粉,缓慢振荡,使培养液混合均匀后,用透气薄和皮筋将瓶口封好,在121 下高压蒸汽灭菌30~40min。

接种。在超净工作台在常规消毒方法,采用无菌操作技术用移液枪将2~3mL液体菌种均匀的接入栽培瓶中。 培养。将接种好的蛹虫草栽培瓶置于表1的五种条件下进行培养,通过观察比较各条件下的现蕾早迟,出草快慢和品质好坏。

表1

蛹虫草的不同培养条件

Table1 ThedifferentcultureconditionsofCordycepsmilitaris

培养条件Cultureconditions

开始16 ,待菌丝长满培养基后,调温度18 ,黑暗,湿度90%,培养至出草。

开始16 ,待菌丝布满培养基表面后,调温度18 ,当菌丝长至培养基2/3时,给予33%的散射光照射,湿度90%,培养至出草。

开始16 ,待菌丝布满培养基表面后,调温度18 ,当菌丝长满培养基后,给予33%的散射光照射,湿度90%,培养至出草。

开始16 ,待菌丝布满培养基表面后,调温度18 ,当菌丝长至培养基2/3时,给予33%的散射光照射,菌丝转淡黄色时,给予10 温差刺激,湿度90%,子实体长2~3cm时,18 出草。

开始16 ,待菌丝布满培养基表面后,调温度18 ,当菌丝长满培养基后,给予33%的散射光照射,菌丝转淡黄时,给予10 温差刺激,湿度90%,子实体长2~3cm时,18 出草

[8]

1.2.3 蛹虫草形态观察与计算 现蕾,当培养基表面再现乳黄色针尖状小刺(1mm左右)时即为现蕾;现蕾密度,以培养基表面出现乳黄色针尖状小刺的多少来衡量,若现蕾面积占培养基料面4/5以上则现蕾密度较大,现蕾面积占培养基料面1/2~4/5则现蕾密度大,现蕾面积占培养基料面1/3~1/2则现蕾密度少,现蕾面积占培养基料面1/3以下则现蕾密度较少。

子实体粗度,以单个鲜子实体周长来表示,测量方法是用缝纫线沿子实体绕一圈,然后测量线的长度,即为子实体周长,单位以cm计算。

子实体的长度,即单个鲜子实体的高度,用直尺量子实体的高度,单位以cm计算。

2 结果与分析

2.1

五种不同培养条件下蛹虫草子实体产量与品质差异明显

通过在不同的温度、湿度和光照条件下的培养,蛹虫草的产量和品质差异很大。在五种不同的培养条件下,蛹虫草的现蕾密度、产量,子实体色质、形态也不一样,如表2和图1。2.2五种不同培养条件下蛹虫草子实体现蕾历期与采草历期差异明显

通过在不同的温度、湿度和光照条件下的培养,蛹虫草从播种到现蕾所需的时间不同,且从现蕾到第3

第3期谢春芹等:蛹虫草人工培养条件的研究

表2

五种培养条件下蛹虫草子实体生长发育情况

347

Table2 Thegrowthanddevelopmentoffruitingbodiesofcordycepsmilitarisunderfivecultureconditions

子实体 econditions

现蕾密度大,出现子实体个数较少,生长不良,子实体较细,形态较好,颜色呈乳白色现蕾密度较大,出现子实体个数较少,生长较好,粗细适中,形态较好,颜色呈黄色。

现蕾密度较大,出现子实体个数较多,生长较好,子实体粗细适中,形态最好,颜色呈桔黄色。没有现蕾

现蕾密度较小,零星出现几个子实体,子实体较细,形态较好,颜色呈淡黄色。

蛹虫草现蕾密度、子实体个数、形态和色质

Buddensity,thenumberoftruitingbodies,morphologyandchromatin

图1表3

五种培养条件下蛹虫草子实体差异五种培养条件下蛹虫草现蕾与出草历期

Fig.1 FruitingbodiesdifferenceofcordycepsilitarisunderfivecultureconditionsTable3 Timeofbuddingandthegrassforcordycepsmilitarisunderfivecultureconditions

现蕾历期第一次采草历期第二次采草历期

30d35d53d

22d27d35d

22d13d27d

!未现蕾无子实体无子实体

∀22d

子实体仅有1cm长

55d

表4五种培养条件下第一次采收蛹虫草子实体的周长、长短与采草数

ofC.militarisunderfivecultureconditions

2402406

4314207

!无无无无无无

∀无1无无1无

Table4 Fruitingbodyperimeter,sizeandnumberofcollectedgrassforfirstharvest

周长(cm)长度(cm)采收子实体总数(个)

1cm以上1cm以下5cm以上3cm-5cm1cm-3cm1cm以下长度1cm以上

3404307

注:周长与长度:为单个鲜蛹虫草子实体的周长与长度

ce

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表2、表3结果表明, 环境下子实体历期时间最短,第一次采草的历期也远远短于其他培养条件,且现蕾密度较大,成形的子实体个数较多,子实体粗度适中,色质桔黄,为优质蛹虫草。2.3 五种不同培养条件下蛹虫草子实体的粗细及长短差异

实验中对不同培养条件下两次采收的蛹虫草子实体粗细及长短做了比较,五种培养条件下蛹虫草的粗细及长短存在着一定的差异,如表4-5

表5

五种培养条件下第二次采收虫草的周长、长短与采草数ofC.militarisunderfivecultureconditions

周长(cm)

1cm以上1cm以下5cm以上

长度(cm)

3cm-5cm1cm-3cm1cm以下

采草总数(根)

长度1cm以上

10167154026

110074011

72413171031

!无无无无无无

∀无4无无无4

Table5 Fruitingbodyperimeter,sizeandnumberofcollectedgrassforsecondharrest

表4中结果表明,不同培养条件下第一次采收蛹虫草子实体时其粗细、长短有明显差异,在 培养条

件下蛹虫草周长在1cm以上的占57%,长度在3~5cm的百分率也占57%,而在 培养长条件下虫草周长在1cm以上的占42%,长度在3~5cm的占57%,在 环境下虫草周长在1cm以上的占33%,长度在3~5cm的占33%; 培养条件下采草数为7根, 培养条件下采草数为6根, 培养条件下采草数为7根, 培养条件下采草数为1根。 培养条件与 培养条件下采收的子实体数相同,但 培养条件比 培养条件下子实体粗度与长度个数多。

表5中结果表明,在第二次采收中 培养条件下,采收的蛹虫草周长在1cm以上的比 培养条件稍低,但子实体总数与长度个数远超过 培养条件,因此 培养条件下培养的蛹虫草产量与品质均最为理想。

3

3.13.2

小结与讨论

经过以上五种培养条件下蛹虫草的出草与品质的比较,在 培养条件下,蛹虫草出草快,品质好,产 培养条件下始终未见现蕾,菌丝体层乳白中带有淡黄,与其他条件相比是菌丝长至2/3时进行温

量高,为蛹虫草最佳的培养条件。

差刺激; 培养条件仅长出少许几根子实体,与其他条件相比是菌丝长满培养基时进行温差刺激;由此推断温差刺激可能不利于该菌株子实体的形成。参考文献

[1]李丽珍,杨海如,刘贵巧.蛹虫草高产栽培技术[J].现代农村科技,2010(07):125-128[2]闫 静,周祖法,袁卫东,等.蛹虫草优质高产栽培技术[J].杭州农业与科技,2010(02):72-78[3]尹导群,陈 丽,张 松.蛹虫草抗肿瘤活性物质研究[J].中药材,2010(07):163-168[4]宋金俤,刘 超,华秀红,等.蛹虫草产业化栽培瓶颈及其对策[J].中国食用菌,2009(01):23-29[5]孟繁宇蛹虫草高产菌株人工栽培条件的优化[J].食用菌,2009(04):673-677

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