植物酶提取

导读：　植物酶提取(共7篇)植物酶骗局:植物酶提取不是做豆腐小本创业第一步网提醒：类似植物酶提取这种“包回收”、“低成本”、“高利润”的加工产品回收模式的加盟、合作办厂等等模式的，基本上都是骗子！对这些项目，即使他们吹得再好（如果他是您的亲人、好朋友可能例外），最好的方法就是：敬而远之。如果您是植物酶代加工厂家，已经从中受益，...

篇一 植物酶提取
植物酶骗局:植物酶提取不是做豆腐

　　小本创业第一步网提醒：类似植物酶提取这种“包回收”、“低成本”、“高利润”的加工产品回收模式的加盟、合作办厂等等模式的，基本上都是骗子！对这些项目，即使他们吹得再好（如果他是您的亲人、好朋友可能例外），最好的方法就是：敬而远之。

　　如果您是植物酶代加工厂家，已经从中受益，因此有其它不同意见，敬请与我们探讨，但工厂除外。

　　首先了解一下植物酶。必须承认，这的确是一种用途比较广泛的产品，但是，这并不意味着它就是普通创业者能够靠他赚钱致富的产品。

　　植物酶一直是酶类产品的畅销品。植物酶是将数十种不同的蔬果、谷类、海藻类及菇类等植物，经自然发酵研制而成，保留了植物中的营养精华，含有人体需要的各种酶、寡糖及多种维他命和矿物质，又可产生丰富的SOD抗氧化酶成分，提高体内抗氧化能力，进而增强免疫力。 

　　以营养学的观点来说，植物酶是借由发酵作用，使蔬果分解成较小分子的营养素，可直接被人体迅速吸收、参与调节新陈代谢过程。建议营养摄取不均衡、消化吸收状况差、上班容易疲劳的人，不妨食用植物酶来调整体质。一般建议，植物酶在空腹时食用效果较好，也比较不易受到胃酸的破坏。 

　　同时，根据华中农业大学生命科学技术学院教授梁运祥的介绍，植物酶是从玉米、菠萝、大豆等植物中提取出来的水解植物蛋白，是安全绿色的添加剂，按其纯度高低大致可分为粗酶和精酶。工业上用的酶，纯度低的在每公斤10元左右，高的根据种类不同可以卖到100-300元，科研用的高纯度酶达每克1000元，每公斤达100万元左右。

　　梁运祥介绍，粗酶的提取过程比较简单，将植物重复进行粉碎、溶解、过滤、烘干即可。大批量提取成本高，经济价值低，主要用于发酵。精酶需在实验室运用电溶和层析等方法进行提取，这些设备极为先进，价格不菲。普通人经过短期培训，利用简陋的设备绝对无法制成，与做豆腐区别大了。 

　　以下为记者采访植物酶骗局实例：

　　“投资万元，年利百万，买房买车不是梦”，在网上“武汉九天生物工程公司”的广告格外令人心动。该公司宣称拥有一项提炼植物酶的技术，正在寻找加盟商。该技术所需原料为粮食、蔬菜、水果等农产品，仅需投资万元，年获利可达百万元。

　　近日，记者暗访了这家“高科技公司”，真实地体验了一次他们的忽悠术——

　　“致富热线”：想加盟先交“抢铺费”

　　3月16日上午，记者致电武汉九天生物工程公司“致富热线”，谎称自己是湖北长阳人，有个亲戚想加盟。一自称是公司业务经理的男子熟练地问：“您是要加盟吗？”得到肯定答复后，接着说：“您现在必须马上交500元的抢铺费，因为我们名额有限。你所在的地方很适合办厂，你现在方便通过哪个银行汇款？”

　　当记者告诉他自己就在武汉，想去公司看看时，男子勉强答应。他要求记者带1000元的定金，“免得来晚了，没有加盟机会，白跑一趟。”

　　第一步支招：加盟千万别急于求成，不要相信什么：独家代理之类的鬼话，即使之后是真的，但中国人做同样项目的可不只一家。一般骗人的加盟机构，网上定会有许多投诉，你可以先搜索一下。
　　 
　　“投资指南”：每天进账1340元

　　17日上午，记者来到“九天生物”公司所在地。该公司位于江汉区马场角南达大楼9楼，办公面积不大，墙壁看上去刚粉刷不久。

　　桌上放着一摞投资指南手册，记者拿起一本翻看。手

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篇二 植物酶提取
广州博轩化妆品有限公司:植物酶加工骗局项目

加盟商名称:

广州博轩化妆品有限公司

加盟产品:

提供机器，以机器在各种农作物及植物，提取“植物萃取精华素”（简称植物酶），然后回收产品。属于常见的外发加工回收产品骗局。

项目分析：

植物萃取精华素，植物酶,生产加工回收，植物萃取精华素提取不是在简单技术,简陋设备,小投资可以成功的项目.植物酶加工回收项目设置原材料廉价广泛,生产技术简单,回收产品做陷阱骗取技术转让费,博轩化妆品有限公司很可能是骗子公司,投资风险100%。

联系资料:

地址:广州市白云大道南695-697号金钟大厦209、210 　　邮编:510430 　　电话:020-86183825　 86182872　 86187626 86187659 　　传真:020-86182617 　　手机:13751749373 13751749632 13416402737 　　Q  Q:351693215  373702620 　　邮箱:box988@163.com　网址：

宣传资料:

提取植物酶的农副产品取之不尽 水果类：苹果、橘子、香蕉、梨、西红柿、草莓等 蔬菜类：黄瓜、菠菜、南瓜、白菜、油菜、大蒜、韭菜、胡萝卜、芹菜等 豆   类：黄豆、青豆、蚕豆、豌豆、黑豆、红小豆、绿豆、花生等 菌   类：蘑菇、香茹、银耳、木耳等 谷   物：小麦、大豆、荞麦、谷壳等 农作物：玉米、高梁、玉米棒、油麻杆、油菜杆、棉杆、秸杆等 　　　　　　　　生产条件 不受季节限制，一年四季均可生产，原材料丰富、易取； 材料：各种农作物及植物； 场地：15——50平方米，干净整洁； 人员：1——2人即可操作，人工与设备相结合； 水电：水质干净、220V照明； 　　　　　　　　 效益分析   每公斤农作物可提取:1--1.2克,产品由本公司统一保价回收(110元--205元/克),以日加工10公斤农作物为例:效益分析如下： 成本支出 产品收入 原料成本：5元/公斤×10公斤=50元 日可提取12克×110元/克=1320元 药剂成本35/克×12=420元 人工工资：60元/人×2人×1日=120元 水电、房租、设备损耗、杂费：80元/日×1日=80元 日纯利润：1320-420-120-80-50=650 月纯利润：650×26天=16900元（每月休息4天） 广州博轩化妆品有限公司在中国大陆寻求有能力，信誉好，有一定经济基础的合作伙伴，与我公司合作生产“植物萃取精华素”等化妆品行业应用的贵重原材料，为世界女人的美丽事业做出贡献，也为有志之士带来无限商机。         A、公司免收技术加盟费、培训费、转让费、管理费、及合作信誉金等费用，让广大合作伙伴享受真正的零风险项目合作！         B、公司确保合作伙伴完全独立掌握技术，能够生产出合格产品，免费为合作伙伴培训1—3名技术人员，学会为止(培训期间公司免费提供食宿）。         C、产品由公司统一收购，并与合作伙伴签订1—5年法律公证回收合同，期满可优先续约。         D、保证合作一家成功一家，长期免费提供技术咨询和技术跟踪服务。         E、避免生产方在当地因多人生产而引起不正当的竟争，公司保证合作伙伴在本地区独家生产。         F、若因技术问题造成您的经济损失，本公司承担一切法律责任！

投诉案例:

案例１：http:// 广州博轩化妆品有限公司又是一家以各种农作物及植物，提取植物酶，或者说纤维素骗子公司，他们又是以提供机器，回收产品（植物酶）的合同诈骗公司，他们的目的是骗取你的合同信誉金或机器保证金之类骗子公司请大家不要再上当受骗了，这是我到广州佳康生物科技有限公司考察的经过，一开始问他们的时候说是一分钱都不收,技术包教会,设备自己在当地买.可是来到广东后,他们却说要我们买他们的设备.如果不买,他们就不保证我的产品质量合格,你说这些个王八蛋,明摆就是骗人，现在我看到广州博轩化妆品有限公司他们的骗人手法还更高明呀，现在他们的网站上没有说要你买机器（其实一定要你买的）和他们合作永远是做不出合格的产品来的。他们的目的是骗取你的合同信誉金或机器保证金之类骗子公司请大家不要再上当受骗了。 　　案例２：http://post.cnfol.com/thread/2789604.html 　　以我在招商圈里混了这么多年的经验来看广州博轩化妆品有限公司绝对是属于骗子机构.只是骗取加盟商的加盟金。 　　产品技术含量低，质量差，没有品牌，但产品的价格偏贵；没有选择加盟商的具体标准，只要交钱就行；总部与加盟商商讨的时间比较短，甚至可以当场签约. 　　大家小心啊！ 　　它们刚开始去的时间他们会说的很好，而且还给你免费食宿，当骗的你差不多的时候就让你买他们的机器，你要是不买就做不出合格的产品，但是就算是你买了，他们也说你做不出合格的产品，因为他们的目的已经达到了，他们的目的就是买机器。

媒体新闻

欢迎投诉:

篇三 植物酶提取
酶的分离和纯化

篇四 植物酶提取
农药残留检测用植物酯酶的筛选

西北植物学报，２００８，２８（１）：０１８３一０１８７

ＡｃｆｄＢｏｆ．口ｏｒ口口ｆ．－（ｋｃｌｄｅ万ｆ．Ｓ跏．

文章编号：１０００一４０２５（２００８）０１一０１８３一０５

农药残留检测用植物酯酶的筛选

雷

明１，张

檀。，文建雷２，杨祥２

（１西北农林科技大学林学院，陕西杨陵７１２１００，２西北农林科技大学生命科学学院，陕西杨陵７１２１００）

摘要：基于酶法分析中的酶抑制原理，通过对８种植物种子及２种植物加工材料总酯酶活力及其比活力进行比

较，筛选农药残留检测用适宜的植物酯酶。结果显示，花豇豆总酯酶活力和比活力分别达７．３２５Ｕ和Ｏ．６１７Ｕ／ｍｇ，显著高于其它９个实验材料。用花豇豆酯酶对６种有机磷及氨基甲酸酯类农药——敌敌畏、辛硫磷、敌百虫、速灭威、克百威、灭多威进行敏感性分析，最低检测限均比国家规定的最大残留量小，符合检测要求。结果表明，花豇豆的酯酶总活力、比活力及其敏感性最好，是一种农药残留检测的理想酶源植物。关键词：植物酯酶；酶法分析；总酯酶活力；比活力；敏感性中图分类号：Ｑ５０３

文献标识码：Ａ

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ＳｅｌｅｃｔｉｏｎｏｆＰｈｖｔｏｅｓｔｅｒａｓｅｓＵｓｅｄｉｎＤｅｔｅｃｔｉｎｇｔｈｅＲｅｓｉｄｕｅＯｆＰｅｓｔｉｃｉｄｅｓ

ＬＥＩＭｉｎ９１，ＺＨＡＮＧ

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Ｘｉａｎ９２

（１ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＦｏｒｅｓｔ，ＮｏｒｔｈｗｅｓｔＡ＆ＦＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙａｎｇｌｉｎｇ，Ｓｈａａｎ五７１２１００，Ｃｈｉｎａ；２ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅ，ＮｏｒｔｈｗｅｓｔＡ＆ＦＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＹａｎｇＩｉｎｇ，Ｓｈａａｎ，ｄ７１２１００。Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｒｏｕｇｈｅｍｐｌｏｙｍｅｎｔｏｆｔｈｅｅｎｚｙｍｅｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｅｎｚｙｍａｔｉｃａｎａｌｙｓｉｓ，ｔｈｅｇｅｎｅｒａｌｅｓｔｅｒ—

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ｂｏｆｕｒａｎａｎｄｍｅｔｈｏｍｖｌ）．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｌｉｍｉｔｓｏｆｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗｅｒｅｌｏｗｅｒｔｈａｎｔｈｅｍａｘｉｍｕｍｏｆｒｅｓｉｄｕｅｌｉｍｉｔ。ｗｈｉｃｈｍｅｅｔｓｔｈｅｎａｔｉｏｎａｌｓｔａｎｄａｒｄｏｆｄｅｔｅｃｔｉｏｎ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔｔｈｅｅｓｔｅｒａｓｅｏｂ—ｔａｉｎｅｄｆｒｏｍ１ｐＩｇ靠口ｓｐ．ｐｏｓｓｅｓｓｅｓｔｈｅ

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农药残留（ｐｅｓｔｉｃｉｄｅｒｅｓｉｄｕｅ），是农药使用后一个时期内未被分解而残留于生物体、收获物、土壤、水源、大气中的微量农药原体、有毒代谢物、降解物和杂质的总称口］。进入２１世纪，全球农业发展的一个重要趋势是更加注意农产品及食品的质量安全性，倡导安全优质的绿色食品［２矗］。然而，近几年中

收稿日期：２００７一０９—１０；修改稿收到日期：２００７—１２—１９基金项目：西安市科技局攻关项目（ＧＧ０６１４０）

国每年发生农药中毒的人数均超过１０万人，每年因农药引起的食物中毒发病率居化学性中毒之首。出口农产品因农药残留量超标，不仅造成巨大的经济损失，而且严重影响了中国的外贸声誉。因此，建立快速高效的农药残留检测机制是一个十分重要的问题。

作者简介：雷明（１９８０一）。男（汉族），硕士研究生，主要从事野生植物资源保护与利用的研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｅｉｍｉｎｇ＿０３１２＠１６３．ｃｏｍ＊通讯作者：张檀，副教授，硕士生导师，主要从事野生植物资源保护与利用方面的教学与研究。Ｅ－ｍａｍｚｈａｎｇｔａｒＬ２１５＠１６；．００ｍ

西北植物学报

２８卷

酶抑制法测定有机磷及氨基甲酸酯类农药残留，具有快速、简便、灵敏及成本低等优点，深受广大基层监督部门、生产基地及市场的欢迎［４’５］。其原理为：酯酶可以催化羧酸酯类物质水解，有机磷和氨基甲酸酯类农药对酯酶催化水解的正常功能有抑制作用，其抑制率与农药的浓度呈正相关。一般是通过抑制率判断样品中是否含有机磷或氨基甲酸酯类农药的存在及其含量的多少［６］。酶抑制法中酶最为关键，但目前有关植物酯酶的研究报道，大多数是以小麦、面粉、黄豆等为酶源，且在酶源的选取上缺乏理论根据。本研究扩大植物酶源的选取范围，以总酯酶活力和比活力为指标，对小麦（Ｔ一￡ｉｃＭ优口Ｐｓ￡ｉ一

口“７ｎＬ．）、油菜（Ｂｒ口ｓｓｉｆ口７ｚｎ户“ｓＬ．）、萝卜（Ｒ口ｐ＾口一

咒“ｓ

ｓ口￡ｉ可“ｓ

Ｌ．）、花生（Ａｒ口以始＾ｙ夕ｏｇ口Ｐ口Ｌ．）、黄豆

（ＧＺｖｃｉ咒ｅ仇口ｚ

Ｍｅｒｒｉｌｌ）、绿豆（Ｐ＾口ｓＰｏＺ“ｓ

ｒｎｄｉ口￡“ｓ

Ｌ．）、芸豆（Ｐ＾口ｓＰＤＺ“ｓ删０９口以ｓＬ．）、花豇豆（Ⅵｇ咒口ｓｐ．）种子及２种小麦加工产物面粉（ｗｈｅａｔｆｌｏｕｒ）和麦麸（ｗｈｅａｔｂｒａｎ）进行筛选，拟选取适宜的植物酶源，再通过对６种有机磷及氨基甲酸酯类农药进行敏感性比较，得到其最低检测限（ＬＯＤ），以确定其作为农药残留检测用植物酯酶的可行性。

１材料和方法

１．１材料和仪器

小麦、油菜、萝卜、花生、黄豆、绿豆、芸豆、花豇豆，均为常温干燥条件下保存的当年收获的种子；小麦面粉、麦麸为新鲜加工材料。

固蓝Ｂ盐溶液：以３．４％的ＳＤＳ为溶剂，配制成Ｏ．８％的固蓝Ｂ盐溶液，滤纸过滤。

ａ一乙酸萘酯丙酮溶液（１６ｍｍｏｌ／Ｌ）：称取２９７．９

ｍｇ

ａ一乙酸萘酯定溶于１００ｍＬ丙酮溶液中。除ＳＤＳ为化学纯外，其它所用试剂均为国产分析纯。ＦＡ２００４型电子天平，上海精科天平厂生产；恒

温水浴锅，北京科伟永兴仪器有限公司生产；高速冷冻离心机，德国Ｓｉｇｍａ公司生产；ＵＶ一２１００紫外可见分光光度计，美国Ｕｎｉｃｏ公司生产。

１．２方

法

１．２．１植物酯酶粗酶液的制备［７’８３将植物材料

粉碎，按料液比１：５加提取液（０．１ｍｏｌ／Ｌ，ｐＨ６．４

磷酸盐缓冲液），振荡或搅拌１０～３０ｍｉｎ，放置过夜

（４℃），用３层纱布过滤，于４℃条件下，１０

ｏｏｏ

ｒ／

ｍｉｎ冷冻离心１０ｍｉｎ，收集上清液，即为粗酶液。

１．２．２

总酯酶活力测定方法

（１）总酯酶活力的测

定［９’１０］

在试管中依次加入１．９５０ｍＬ磷酸盐缓冲

液（Ｏ．０４ｍｏｌ／Ｌ，ｐＨ

６。４）、０。０５

ｍＬ旷乙酸萘酯丙

酮溶液（Ｏ．０１６ｍｏｌ／Ｌ）和ｏ．５ｍＬ稀释后的酶液。混匀试管中的溶液，同时开始记时。把试管放入３０℃的恒温水浴中反应１５ｍｉｎ，取出试管，在其中加入ｏ．５ｍＬ固蓝Ｂ盐溶液。混匀试管中的溶液，同时开始记时。把试管放入３０℃的恒温水浴中反应１０ｍｉｎ。取出试管，采用ＵＶ一２１００紫外可见分光光度计，在５９５ｎｍ处测定溶液吸光度。根据相应ｐＨ值下的旷萘酚标准曲线和测得的吸光度，可以得到总酯酶活力的计算式为：

Ｅ＝Ｄｘ茎２｛等掣×１０６

式中，Ｅ为每毫升酶液所含的总酯酶活力（Ｕ／ｍＬ）；Ｄ为酶液的稀释倍数；Ｋ为对应ｐＨ下ａ一萘酚的标准曲线的斜率；０Ｄ５。。为反应后在波长５９５ｎｍ处测得的吸光度；Ｕ为酶活力单位，１Ｕ定义为在规定条件下，每分钟催化得到１肛ｍｏｌａ一萘酚所需的酶量。

・

（２）ａ一萘酚的标准曲线的制作口１］

配制１

ｍｍｏｌ／Ｌ的ａ一萘酚无水乙醇标准溶液，用移液枪准确吸取０、１０、２０、３０、４０、５０、６０肚Ｌ的０ｃ一萘酚无水乙醇标准溶液，加磷酸盐缓冲溶液（Ｏ．０４ｍｏｌ／Ｌ，ｐＨ

６．４）至３ｍＬ，然后加ｏ．５ｍＬ固蓝Ｂ盐溶液，混合

均匀，于３０℃恒温水浴保温１０ｍｉｎ。用缓冲液作空白，在５９５ｎｍ处读取以上反应液的吸光度。以浓度为纵坐标，吸光度为横坐标，作图得标准曲线，其斜率为：

Ｋ—ｆ妻警１／咒

＼Ｆ１Ｌｉ，

式中，Ｋ为标准曲线的斜率，Ｃ；为ａ一萘酚溶液浓度，０Ｄ；为反应液在５９５ｎｍ处的吸光度（ＯＤ），咒为标准曲线的浓度点数。

１．２．３

比活力的测定按照下列公式计算

比活力＝总活力（Ｕ）／总蛋白（ｍｇ）１．２．４蛋白含量的测定［１２］以牛血清蛋白为标准

蛋白，制作标准曲线，用Ｆ０１ｉｎ－酚法，测定酶液的蛋

白含量。

１．２．５

对不同农药敏感性及最低检测限的测定［１３．１４］

分别配制１．２８、ｏ．６４、Ｏ．３２、Ｏ．１６、０．０８、【植物酶提取】

ｏ．０４

ｍｇ／ｍＬ系列浓度的有机磷及氨基甲酸酯类农

药（均折算成纯化学物质含量），按总酯酶活力测试步骤，将１．９５０ｍＬ含有不同浓度农药的缓冲液取代不含农药的缓冲液，测试不同农药对植物酯酶的抑制程度，其计算式为：

１期雷明，等：农药残留检测用植物酯酶的筛选

１８５

Ｊ—Ｉ三娑ｌ×１００％

Ｌ

Ｅｌ

Ｊ

式中，Ｉ为抑制率，Ｅ。为无农药抑制时酶液酯酶活性，Ｅ。为某一浓度农药抑制时酶液酯酶活性。

将酯酶对农药的灵敏度定义为曲线的斜率Ｋ７。

将农药浓度取对数值，并以之为横坐标对抑制率作

图，得曲线的斜率为：

Ｋ

７一ｆ∑｝ｌ／”

，ｎ

Ｔ

、

、ｉ＝ｌＩｇｃｆ，

式中，Ｋ７为该酯酶对农药的灵敏度，Ｑ为农药物质的量浓度（ｍ０１／Ｌ），Ｉ；为农药浓度为ｃｉ时的抑制率，行为曲线的测试浓度点数。

根据所使用分光光度计的误差范围和国家规定的最大残留限量（ＭＲＬ），以可以检测到的最小农药浓度为初定检测限，在此浓度下与空白反应液测定值进行ｔ检验（ｎ＝６），确定植物酯酶对各种有机磷及氨基甲酸酯类农药的最低检测限。

２结果与分析

２．１竹萘酚及蛋白质含量的标准曲线

植物酯酶水解底物ａ一乙酸萘酯生成乙酸和旷萘酚，ａ一萘酚与固蓝Ｂ盐作用生成紫红色的偶氮化合物。依据图１所示ａ一萘酚含量的标准血线，根据总酯酶活力的计算公式，即可计算得到植物酯酶的总活力。图１旷萘酚标准曲线的决定系数达

０．９９７

３，线性关系表现良好。

根据比活力的计算公式，需测定植物酯酶的总蛋白含量，本试验选取牛血清蛋白为标准蛋白，用Ｆｏｌｉｎ一酚法测定。牛血清蛋白含量的标准曲线如图２，决定系数达０．９９９７，其线性关系表现良好。２．２不同来源的植物酯酶总酯酶活力的比较

选取小麦、油菜、萝卜、花生、黄豆、绿豆、芸豆、花豇豆等８种植物种子及面粉和麦麸作为酶源材料，分别提取总酯酶后，测定其总酯酶活力，方差分

１ＯＯ８Ｏ６

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Ｏ４《／ｕ声《Ｏ２

Ｏ

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Ｏ．００５

０．０１

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ａ．萘酚浓度

Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆａ．Ｃｌ。Ｈ。ｏ／（ＩＩｍｏｌ・Ｌ一’）图１

ｒ萘酚的标准曲线

Ｆｉｇ．１

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１５０

２００

２５０

牛血清蛋白含量

Ｂｏｖｉｎｅｓｅｒｕｍａｌｂｕｍｉｎｌｅｖｅｌ／（ｕ

ｇ・ｍＬ一１）

图２蛋白质的标准曲线

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植物酶源

Ｐｌａｎｔｍａｔｅｒｉａｌｓ

图３不同植物酶源总酯酶活力

不同小写字母表示差异显著ｌＩ。油菜；Ⅱ．小麦面粉；Ⅲ．小麦；

Ⅳ．麦麸；Ｖ．萝ｈ；Ⅵ．花生；Ⅶ．黄豆；Ⅶ．芸豆；

Ⅸ．绿豆；Ｘ．花豇豆．图４同

Ｆｉｇ．３

Ｇｅｎｅｒａｌ

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ｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｐｌａｎｔｍａｔｅｒｉａｌｓ

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Ｌ．｝Ⅱ．Ｗｈｅａｔｎｏｕｒ，Ⅲ．ｎｉｆｉｃ“优口Ｆ鲥ｔＪ毫‘ｍＬ．Ｉ

Ⅳ．Ｗｈｅａｔｂｒａｎ；Ｖ．尺口户，Ｉ口咒“ｓ皿ｆｉ伽ｊＬ．；Ⅵ．Ａｒ口ｃ＾如＾ｙｐｏｇ口Ｌ．｝

Ⅶ．ＧＺ”ｉ雄Ｐ撇ｚＭｅｒｒｉｌｌ；Ⅶ．ｍ４渤Ｚ“５讹Ｚ和ｒ妇Ｌ；

Ⅸ．Ｐ＾口ｓＰｏＺ“ｓ，’ｎｄｉ口ｆ“ｓ

Ｌ．；Ｘ．Ⅵｇ∞ｓｐ．．Ｆｉｇ．４

ｉｓｔｈｅｓａｍｅ

析结果表明，花豇豆的总酯酶活力极显著高于其它酯酶，其活力是小麦的１３．７６２倍、面粉的１７．４３２倍；绿豆、芸豆、黄豆和花生的总酯酶活力依次极显著降低；花生、萝卜、麦麸、小麦、面粉和油菜的总酯酶活力较低，且差异不显著，油菜总酯酶活力最低

（图３）。

２．３不同来源的植物酯酶比活力的比较

用Ｆｏｌｉｎ一酚法测定不同植物酶源的蛋白含量，由比活力的计算方法，得到各植物酯酶的比活力，方

差分析表明，花豇豆酯酶比活力极显著高于其它酯酶，其比活力是小麦的６．２９６倍，面粉的３．８３９倍；绿豆、面粉、芸豆、小麦和萝卜酯酶比活力依次显著降低；小麦、麦麸、花生和黄豆的酯酶比活力低且差异不显著，油菜和萝卜差异不显著，油菜比活力最

西北植物学报２８卷

低。由此可见花豇豆为最适宜的酶源植物（图４）。２．４植物酯酶对有机磷农药的灵敏度和检测限

由于花豇豆总酯酶活力及比活力都最高，故以花豇豆为酶源，对酯酶进行了６种有机磷及氨基甲酸酯类农药的敏感性检测，其结果见表１。

表１表明，花豇豆酯酶对有机磷类农药敌百虫的敏感性最好，达到４０．４３３，其次为对敌敌畏的敏感性，为３１．９８１，对辛硫磷的敏感性为１３．９６７，而对氨基甲酸酯类农药的敏感性普遍较低，可能是农药间化学结构不同造成的。所测农药的浓度与对花豇豆酯酶抑制率间相关性较好，决定系数都在ｏ．９４２

３

小，符合检测要求。

普ｏ．８

７

Ｏ．７ｊＯ．６

氓≥ｏ．５

烬。；Ｏ．４

丑号ｏ．３

：ｏ．２

曙Ｏ．１

以上。本研究所测得的对６种有机磷及氨基甲酸酯类农药的最低检测限均比国家规定的最大残留量值

表ｌ

Ｔａｂｌｅｌ

花豇豆蘸酶对农药的敏藤性和最低检测限

Ｐｈｙｔｏｅｓｔｅｒａｓｅｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙａｎｄｐｅｓｔｉｃｉｄｅｌｉｍｉｔｏｆｄｅｔｅｃｔｉｏｎ

注：ｚ表示农药浓度的常用对数，，表示对应的吸光度，一表示未制定．

Ｎｏｔｅ：ｚ，ｙａｎｄ—ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｌｏｇａｒｉｔｈｍｏｆｐｅｓｔｉｃｉｄｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ・ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎａｎｄ

ｎｏ

ｓｔａｎｄａｒｄｒｅｓｐｅｃｔｉＶｅｌｙ

３讨论与结论

植物酯酶作为农药残留检测用３种主要酶生物识别元件之一，来源广泛，取材方便，价格便宜，具有很大的开发利用前景。然而其作为一种生物活性物质，植物酯酶极易失活或变性，故实验材料应选取当年生新鲜植物种子。本实验在选材上既秉承了前人的研究成果，以小麦、面粉、黄豆、绿豆等为原料，同时扩大了酶源的选材范围，增加了一些含油脂和蛋白的植物种子，如油菜籽、萝卜籽、花生、芸豆、花豇豆等。根据文献资料可知，植物酯酶广泛存在于植物活体中，日前研究主要集中在高等粮食作物小麦及其加工产品上。一些研究发现油脂类植物种子在萌发过程中，植物酯酶活性显著增强。其原因是植物酯酶活性因生理条件的改变而得以表现，还是在种子萌发过程中合成了新的植物酯酶，使酯酶的活

性增强，有待于进一步实验研究。

通过对总酯酶活力、比活力等指标测定，可以看出花豇豆总酯酶活力是小麦的１３．７６２倍，比活力是小麦的６．２９６倍，表明花豇豆为适宜植物酶源。通过对６种有机磷及氨基甲酸酯类农药的敏感性实验可以看出，花豇豆酯酶对有机磷农药的敏感性高，而对氨基甲酸酯类农药的敏感性较低，分析原因可能是由于农药化学结构的不同，植物酯酶上存在的与有机磷和氨基甲酸酯类化合物的作用位点也不同，造成酶催化过程中的磷酰化与氨基甲酰化的灵敏度不同，具体表现为花豇豆植物酯酶在酶促反应过程中磷酰化灵敏度高于氨基甲酰化。实验所测得的对所选取的６种有机磷及氨基甲酸酯类农药（除速灭威外）的最低检测限均比国家规定的最大残留量值小，符合检测要求，证明了其作为农药残留检测用植物酯酶的可行性。

１期雷明，等：农药残留检测用植物酯酶的筛选

１８７

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篇五 植物酶提取
农药残留检测用植物酯酶筛选研究

篇六 植物酶提取
茶树叶绿素酶提取、分离纯化与性质的初步研究

篇七 植物酶提取
超声波辅助植物复合酶提取中药茯苓多糖的工艺优化研究

・３８・

长江大学学报（自然科学版）　２０１５年９月第１２卷第２７期（农学下旬刊）

ＪｏｕｒｎａｌｏｆＹａｎｇｔｚｅＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（ＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅＥｄｉｔｉｏｎ）　Ｓｅｐ畅２０１５，Ｖｏｌ畅１２Ｎｏ畅２７

［引著格式］陈小红，马芳，林标声，等畅超声波辅助植物复合酶提取中药茯苓多糖的工艺优化研究［Ｊ］畅长江大学学报（自科版），

２０１５，１２（２７）：３８～４１，５９畅

　　　

超声波辅助植物复合酶提取中药茯苓多糖的工艺优化研究

（龙岩学院生命科学学院，福建龙岩３６４０１２）

　　陈小红，马芳，林标声，沈绍新　

［摘要］比较了单独超声提取与超声辅助植物酶法提取茯苓多糖的效果，结果表明，超声辅助酶法能显著地提高多糖的浸出率和提取率（Ｐ＜０畅０５），其最大多糖浸出率、提取率分别为５畅５４％、４畅７２％，明显地提高了水溶性茯苓多糖的提取效率。通过正交试验，确定了超声辅助酶法提取茯苓多糖的最优工艺条件：粉碎粒度２０～６０目、料水比１∶５、提取次数１次、提取功率９０Ｗ、提取时间３０ｍｉｎ、提取温度５０℃、加酶量２畅０％、酶解温度５０℃、酶解ｐＨ５畅０、酶解时间１２０ｍｉｎ。超声辅助植物酶法是提取水溶性茯苓多糖的有效方法。

［关键词］茯苓多糖；超声波；植物复合酶；优化［中图分类号］ＴＱ９１

［文献标识码］Ａ　　［文章编号］１６７３１４０９（２０１５）２７００３８０４

茯苓（Ｐｏｒｉａｃｏｃｏｓ）是我国传统的药食同源食用真菌，在许多种药品配方中都见其身影，主要起到安神、利尿、健脾、和胃、渗湿等功效

。茯苓多糖是茯苓起主要功效的活性成分，主要结构为β‐（１［２］

→３）‐Ｄ‐葡聚糖，含量最高可达８４畅２％。茯苓多糖分为水溶性和碱溶性多糖，一直以来，通过多种

［３］

［１］

方法获得的水溶性多糖提取率很低，最高产率大约在２畅０％左右中，由于受到细胞壁纤维素成分的阻遏，因而提取率低为单一使用的方法，相互结合的提取方法较少报道

［６～７］

［４］

，严重影响了茯苓多糖的开发与利

用。茯苓中茯苓多糖含量高、提取率低的原因可能与茯苓细胞壁结构有关，茯苓多糖主要存在于细胞壁

。近年来，国内外报到了多种茯苓多糖的提取

［５］

方法，有热水浸提法、酸碱浸提法、酶法、微波辅助提取、超声波辅助提取等方法，但一般报道的多

［８］

。超声波能增强分子的运动速度和频率，使溶剂

。植物

到物质之间的穿透力增强，从而提高物质有效成分溶出的次数和速度，提高活性物质的提取率

复合酶中含有纤维素酶、半纤维素酶、果胶酶、木聚糖酶、α‐淀粉酶、中性蛋白酶等成分，各酶系之间有较好的协同作用，有利于破解植物细胞壁，快速溶解果胶及各类易浑物质，且不破坏植物细胞内的各活性成分，因此有助于缩短生产周期，提高提取率多糖的有效开发与利用提供参考。

［９］

。因此，本研究将超声波提取与植物复合酶提取相

结合提取中药茯苓水溶性多糖，并对其工艺条件进行优化，旨在提高水溶性茯苓多糖的提取率，为茯苓

１　材料与方法

１畅１　试验材料及仪器

茯苓：市场购买的中药茯苓块；植物复合酶：购自宁夏夏盛实业集团有限公司，１ｋｇ／袋；主要仪器有ＹＦ‐１０３型手提高速中药粉碎机、８６‐２型磁力加热搅拌器、７ＤＬ８０‐２Ｂ型低速台式离心机、ＨＨ‐Ｓ１数显恒温水浴锅、ＫＨ‐１０００ＴＤＥ数控超声波清洗器。

　［收稿日期］２０１５

０６

０５

　［基金项目］龙岩学院百名青年教师攀登项目（ＬＱ２０１３０２４）；龙岩学院产学研合作项目（ＬＣ２０１３０１０）；福建省大学生创新创业训

练计划项目（Ｓ２０１４１０１８）。

　［作者简介］陈小红（１９７９），女，实验师，研究方向为生物工程。通信作者：沈绍新，ｓ８９１７＠１６３畅ｃｏｍ。

第１２卷第２７期陈小红等：超声波辅助植物复合酶提取中药茯苓多糖的工艺优化研究　・３９・

１畅２　方法

１畅２畅１　水溶性茯苓多糖的提取工艺流程及方法

茯苓→粉碎→过筛→加水、超声提取→过滤得滤液、滤渣→滤渣再超声提取１～３次→合并几次滤

［１０］

液，苯酚硫酸法测定滤液中多糖含量，计算滤液多糖总质量、多糖的浸出率→滤渣用温水溶解、加复合酶酶解→过滤得酶解液、滤渣→滤渣再酶解１次→合并酶解液，并与原超声提取液合并，用苯酚硫酸法测定合并液中多糖含量→计算合并液多糖总质量、多糖的浸出率。

多糖的提取：将合并液真空浓缩，利用Ｓａｖａｇｅ法除蛋白后加入３倍量９５％乙醇沉淀，４℃冰箱静置过夜，离心取沉淀，依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，再用大孔树脂纯化、透析、冷冻干燥得茯苓

［１１］

多糖，称重。按下述公式计算多糖的浸出率和提取率。

多糖的浸出率＝测定的溶液中多糖总质量／原取的茯苓块质量×１００％多糖的提取率＝称重的茯苓多糖质量／原取的茯苓块质量×１００％１畅２畅２　超声提取茯苓多糖的工艺条件优化　　药材的粉碎粒度、药材溶解的料水比、表１　Ｐｌａｃｋｅｔｔ‐Ｂｕｒｍａｎ试验设计的因素水平表和编码超声提取的次数、超声提取的功率、超声提取的时间、超声提取的温度６个因素对超声Ｘ１粉碎粒度／目１０～２０６０～１００提取茯苓多糖影响较大，采用响应面分析法Ｘ２料水比／（ｇ／ｍＬ）１︰５１︰１０

Ｘ３提取次数１３中Ｐｌａｃｋｅｔｔ‐Ｂｕｒｍａｎ试验设计，以茯苓多糖

Ｘ４提取功率／Ｗ７０９０的浸出率为响应值考察影响提取效果的显著

因素，６个因素Ｐｌａｃｋｅｔｔ‐Ｂｕｒｍａｎ试验设计

６如表１所示。

在Ｐｌａｃｋｅｔｔ‐Ｂｕｒｍａｎ试验设计的基础上，选择对响应值影响显著的关键因素进行正交试验的优化试验，同样以茯苓多糖的浸出率为指标确定影响超声提取多糖效果的最佳工艺条件，并进行最佳工艺条件下的验证性试验。

１畅２畅３　超声辅助植物酶法提取茯苓多糖的工艺条件优化

在上述超声提取茯苓多糖工艺优化的基础上，选择最佳的工艺条件进行辅助酶法的后续试验，影响酶法提取的因素条件有加酶量、酶解温度、酶解ｐＨ、酶解时间，选定上述４个因素进行正交试验的优化试验，以茯苓多糖的浸出率为确定影响超声辅助酶法提取多糖效果的最佳工艺条件，并进行最佳工艺条件下的验证性试验。　　

分别在最佳工艺条件下，对比分析单独超声提取和超声辅助植物酶法提取茯苓多糖的浸出率和提取率。

提取时间／ｍｉｎ

Ｘ５

３０

９０

２　结果与分析

２畅１　超声提取茯苓多糖的工艺条件优化

利用Ｍｉｎｉｔａｂ１５软件对表１的Ｐｌａｃｋｅｔｔ‐Ｂｕｒｍａｎ试验设计进行拟合和方差分析，结果如表２、表３所示。结果表明：影响超声提取茯苓多糖效果的因素重要性依次排序是粉碎粒度（目）（Ｘ１）﹥提取功率（Ｘ４）﹥提取温度（Ｘ６）﹥提取次数（Ｘ３）﹥料水比（Ｘ２）﹥提取时间（Ｘ５）。其中，粉碎粒度（目）（Ｘ１）、提取功率（Ｘ４）、提取温度（Ｘ６）对响应值的影响达到了显著水平，因而选定此３个水平做进一步的正交试验分析。

・４０・　农学下旬刊倡食品科学

表２　Ｐｌａｃｋｅｔｔ‐Ｂｕｒｍａｎ试验设计及响应值【植物酶提取】

２０１５年９月

１２３４５６７８９１０１１１２

Ｘ１１－１１１１１１－１－１－１－１－１

Ｘ２－１１１－１１１－１１１－１－１－１

Ｘ３－１－１－１１－１１１１１１－１－１

Ｘ４－１－１１－１１－１１－１１１１－１

Ｘ５１－１－１－１１１－１１－１１１－１

Ｘ６１１－１－１－１１１－１１－１１－１

１８．７

１６．５２０．８１７．５２０．６２０．４２３．６１５．３１７．６１６．９１８．７１４．７

表３　Ｐｌａｃｋｅｔｔ‐Ｂｕｒｍａｎ试验设计各因素影响结果分析

１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５００．１８３３００．２１６７００．０９１７００．１０８３００．２９８８００．２９８８００．２９８８００．２９８８０３．１０３．６０７．７１０７．３２００．０８０９．７９５４２６显著０２．５１６７－００．０１６７０１．２５８３

－００．００８３４２．１

－００．３

　　粉碎粒度（目）、提取功率、提取温度３个因素对超声茯苓多糖提取的正交试验结果如表４所示。

结果表明：３因素的重要性依次为为Ａ＞Ｂ＞Ｃ，即粉碎粒度（目）＞提取功率＞提取温度，该结果与Ｐｌａｃｋｅｔｔ‐Ｂｕｒｍａｎ试验设计各因素显著性分析一致，最优的组合为Ａ２Ｂ３Ｃ２，即粉碎粒度２０～６０目、提取功率９０Ｗ、提取温度５０℃。

结合上述Ｐｌａｃｋｅｔｔ‐Ｂｕｒｍａｎ试验设计结果，按照经济和效益的原则，选定单独超声提取茯苓多糖的最佳工艺条件为粉碎粒度２０～６０目、料水比１︰５、提取次数１次、提取功率９０Ｗ、提取时间３０ｍｉｎ，提取温度５０℃。在上述最优条件下进行３次的超声提取的验证试验，所得的多糖浸出率均值为４畅２１％。

表４　单独超声提取正交试验结果

１２３４５６７８９ｋ１ｋ２ｋ３１（１０～２０）

１１２（２０～６０）

２２

３（６０～１００）

３３【植物酶提取】

３０．７３８．０３２．８１（７０）

２（８０）３（９０）１２３１２３３２．１３３．３３６．２１（２５）

２（５０）３（７５）２３１３１２３３．８３４．８３３．０２７．５

３２．６３２．２３７．３３５．２４１．７３１．７３２．２３４．７

２畅２　超声辅助植物酶法提取茯苓多糖的工艺条件优化

加酶量、酶解温度、酶解ｐＨ、酶解时间是使用植物酶提取茯苓多糖的４个影响因素，因此同样选

第１２卷第２７期

４

陈小红等：超声波辅助植物复合酶提取中药茯苓多糖的工艺优化研究　・４１・

定Ｌ９３正交试验表进行优化试验，结果如表５所示，结果表明：４因素的重要性依次为为Ｃ＞Ａ＞Ｂ＞Ｄ，即酶解ｐＨ＞加酶量＞酶解温度＞酶解时间，最优的组合为Ｃ２Ａ３Ｂ２Ｄ３，即酶解ｐＨ５畅０、加酶量２畅０％、酶解温度５０℃、酶解时间１２０ｍｉｎ。在上述最优条件下进行３次的超声植物酶辅助提取的验证试验，所得的多糖浸出率均值为５畅５４％。

表５　超声辅助酶法提取正交试验结果

１２３４５６７８９ｋ１ｋ２ｋ３１（１０．）

１１２（１５．）２２３（２０．）３３４７．５５２．０５３．３１（４５）

２（５０）３（５５）１２３１２３４８．７５２．８５１．４１（４５．）２（５０．）３（５５．）２３１３１２４７．６５３．５５１．７１（６０）

２（９０）３（１２０）

３１２２３１４９．３５１．１５２．４４０．３

５２．１５０．２５５４５３．８３．０９．３１．９

５３．３５４．６

２畅３　２种提取方法的对比分析

单独超声提取和超声辅助植物酶法提取茯苓多糖３次验证试验浸出率、对应提取率的均值比较结果如表６所示，结果表明：２种提取方法多糖浸出率和对应提取率均存在显著差异，超声辅助酶法提取效果要明显好于单独超声提取，且差别明显（Ｐ＜０畅０５）。超声辅助酶法的多糖提取率均值可以达到４畅７２％，比报道的水溶性茯苓多糖最高提取率在２畅０％左右有了明显的提高，超声辅助酶法提取水溶性茯苓多糖取得了较好的结果。

表６　２种多糖提取方法比较

项目

３次验证试验结果均值ｔ值４２．５、４１．８、４２．１

４２．１

５５．７、５５．１、５５．３

５５．４

３７．０、３５．９、３７．５

３６．８

４６．８、４６．２、４８．７

４７．２

－４９２．４

－１１７．３

３　小结

本研究比较了单独超声提取与超声辅助植物酶法提取茯苓多糖的效果，结果表明超声辅助酶法能显

著提高多糖的浸出率和提取率（Ｐ＜０畅０５），其最大多糖浸出率、提取率分别为５畅５４％、４畅７２％，明显地提高了水溶性茯苓多糖的提取效率。通过正交试验，优化得到了超声辅助酶法提取茯苓多糖的最优工艺条件为：粉碎粒度２０～６０目、料水比１∶５、提取次数１次、提取功率９０Ｗ、提取时间３０ｍｉｎ、提取温度５０℃、加酶量２畅０％、酶解温度５０℃、酶解ｐＨ５畅０、酶解时间１２０ｍｉｎ。

［１２］

茯苓多糖难溶于水，导致其水溶性多糖的提取率较低。植物复合酶可以降低多糖的分子质量和

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第１２卷第２７期汪娟等：农村集体建设用地入市流转的必要性与可行性分析　・５９・

也十分丰富，本研究对于当前集体土地入市流转问题只是集中在理论方面，对集体建设用地入市流转实证分析较少，仍需同广大研究者一起加强对集体建设用地入市流转的实证研究，了解入市流转对农村经济发展的现实影响，为完善我国集体土地入市流转的制度体系提供现实参考和理论依据。

［参考文献］

［１］张鹏．农村集体建设用地流转机制与绩效研究［Ｄ］．杭州：浙江大学，２００７．

［２］程久苗．农村集体建设用地流转制度的创建及相关问题的思考［Ｊ］．南京农业大学学报，２００２，２５（３）：８９～９４．［３］叶伦文，黄利宏，艾南山．农村集体建设用地自发流转的原因探讨［Ｊ］．国土资源科技管理，２００３，（１０）：１２～１５．［４］甘藏春，束伟星．全力打造新机制———谈农民集体建设用地制度改革［Ｊ］．中国土地，２００１，（３）：１１～１３．［５］朱靖．我国农村集体建设用地流转研究［Ｄ］．雅安：四川农业大学，２００２．［６］贺妮娜．我国农村集体建设用地流转研究［Ｄ］．武汉：华中科技大学，２００６．［７］周江．集体土地使用权流转利弊分析［Ｊ］．中国房地信息，２００６，（３）：７２～７３．

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分子间粘度，提高其水溶性；且植物复合酶在常温和非有机溶剂条件下进行提取，不易破坏多糖结构，

［１３］［１４］

有利于保持生物活性。而超声波提取天然活性成分具有效率高、周期短、活性损失低等特点。因此，本研究选定超声辅助植物酶法提取水溶性茯苓多糖，有效地结合了超声波提取与酶法提取２种方法，使得茯苓中多糖的浸出更为充分，提取率更高，且该提取方法操作较为温和、多糖的活性及立体结果更不容易被破坏，是一种较好的茯苓多糖提取方法。

［参考文献］

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［２］李俊，韩向晖，李仲洪，等．茯苓多糖的提取及含量测定［Ｊ］．中国现代应用药学，２０００，１７（１）：４９．

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［５］高杰，李玉欣，于占华，等．茯芩多糖提取方法研究［Ｊ］．吉林中医药，２００７，２７（９）：６０．

［６］林标声，杨生玉，姜辉，等．茯苓液体培养法中羧甲基茯苓多糖（ＣＭＰ）的提取、纯化及鉴定［Ｊ］．河南大学学报（自然科学版），

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［７］才玉婷，武蕾蕾，王晶华，等．茯苓多糖提取方法研究进展［Ｊ］．牡丹江医学院学报，２００９，３０（６）：５８～６０．［８］张颖．对茯苓多糖提取方法的比较研究［Ｊ］．中国实用医药，２０１２，７（４）：２４９～２５０．

［９］吴鹏，陈龙，郭峰，等．生物复合酶在植物提取中的应用研究［Ｊ］．中国现代中药，２００８，１０（１）：３１．［１０］丰朝霞，张鸿．分光光度法测定茯苓中多糖总糖含量［Ｊ］．时针国医国药，２０００，ｌ１（２）：１０９．

［１１］张晓娟，胡选萍，冯自立，等．微波辅助酶法提取茯苓中茯苓多糖的工艺研究［Ｊ］．安徽农业科学，２００９，３７（２８）：ｌ３７９３～

１３７９４，ｌ３７９６．

［１２］杨树东，包海鹰．茯苓中三萜类和多糖类成分的研究进展［Ｊ］．菌物研究，２００５，３（３）：５５～６１．［１３］赵素霞．酶法提取桑椹多糖的工艺研究［Ｊ］．中医研究，２００３，１６（６）：１９～２０．

［１４］姜珥，潘利华，罗建平．超声辅助提取对茯苓多糖免疫活性的影响［Ｊ］．食用菌学报，２０１２．１９（４）：７９～８２．

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