溶菌酶鸡蛋

导读：　溶菌酶鸡蛋(共7篇)鸡蛋里提取溶菌酶？又是骗你没商量鸡蛋里提取溶菌酶：溶菌酶是一种可以杀死对人体中部分有害病菌的生化物质，它是科学家经过长期的科学研究，在非常复杂和严格的条件下提取出来的。可是如果有人告诉你，这样的高科技产品，任何人在一般的条件下都能够生产出来，而且还能获得高额利润，你相信有这样的事情存在吗？ 先看看广...

篇一 溶菌酶鸡蛋
鸡蛋里提取溶菌酶？又是骗你没商量

　　鸡蛋里提取溶菌酶：溶菌酶是一种可以杀死对人体中部分有害病菌的生化物质，它是科学家经过长期的科学研究，在非常复杂和严格的条件下提取出来的。可是如果有人告诉你，这样的高科技产品，任何人在一般的条件下都能够生产出来，而且还能获得高额利润，你相信有这样的事情存在吗？

　　先看看广告吹吧：

　　投资小，利润高：投入四千八，月赚一万元！

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　　原料易得：主要是以鸡蛋为原料，鸡蛋在生活中随处能买到，其它常用的化工原料在一般商店都能买到；

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　　——适合各类投资者，更是中小创业者和广大下刚职工的创业福音。

　　可是，实际上.......

　　高科技混淆视听，“溶菌酶”到底是什么：

　　溶菌酶是一种无毒、无副作用的蛋白质，又具有一定的溶菌作用，因此可用作食品防腐剂。现已广泛应用于水产品、肉食品、蛋糕、清酒、料酒及饮料中的防腐；还可以添入乳粉中，使牛乳人乳化，以抑制肠道中腐败微生物的生存，同时直接或间接地促进肠道中双歧杆菌的增殖。此外，还能利用溶菌酶生产酵母浸膏和核酸类调味料等。

　　虽然，溶菌酶是一种国内外都很紧俏的生化物质，然而，“溶菌酶”的提取，是科学家经过长期的科学研究，在非常复杂和严格的条件下完成的。广告宣传只道出了溶菌酶的经济价值，歪曲了其提取困难的事实，对投资者构成误导。

　　活力6250的溶菌酶价格是1公斤1600元左右。

　　提取出的“溶菌酶”到底能不能合格：

　　当加盟者把提取出来的溶菌酶送到公司的时候，却被告之产品不合格，拒绝回收。众多投资者就不明白了——为什么自己完全严格按照公司教给的方法提取出来的溶菌酶却不合格呢？于是，就有人几经周折把自己提取的溶菌酶送到北京大学生命科学院，请专家对此进行检测。检测结果发现，提取出来的这个东西根本不是“溶菌酶”，说它含有“溶菌酶”的话也只是微量含有，含量还不到1%，也就是说根本没有利用的价值。

　　产品不合格没错，提取程序也没有错，到底错在哪呢？名眼的投资者明白，错就错在所谓的“高科技”技术本身了。既然产品不合格，回收不成，投资者的利润就不能实现，“月赚万元”也就是句空话了。投资者搭进去的除了时间，耐心，更是几千元的加盟费。

　　这样，生物公司骗人的伎俩也就被彻底暴露了，因为只要加盟者生产不出合格的产品，合同中所有有利于加盟者的条款和承诺都成了空中楼阁，而且，他们付出的几千元加盟费也白白的被拿走了，加盟者也只有在回到当地后才发现受骗上当了，但是此时却已经给自己造成了损失了。

　　其实，“溶菌酶”提取条件要求极为苛刻。2005年底时，世界上最大的鸡蛋粉生产企业比利时百乐沃公司在天津建设了国内第一个鸡蛋粉加工基地，其系列产品中，就包括溶菌酶和卵磷脂。该基地年加工能力将达到3000吨，每天需要110万个鸡蛋，该项目首期投资1.5亿元，全部采用最先进的进口设备和技术。溶菌酶和卵磷脂这样的物质，活性大，很容易变性，提取和保存的难度非常大，对生产条件和生产环境要求非常严格。投资几万、几十万元小打小闹，根本不可行，更别说“几百元”了。

　　专家评论：

　　茹教授告诉记者，提取溶菌酶是一项专业性相对很强的技术，不仅对环境温度、工艺流程的技术有着严格的要求，而且操作者还必须具有生化专业知识。但是生物公司传授溶菌酶的提取技术，却是在一间简陋房间的卫生间里进行的，设备也只是简单的一些玻璃器皿。

篇二 溶菌酶鸡蛋
sod/溶菌酶/蛋白质粉－华粤生物技术

项目图片

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创业项目

sod/溶菌酶/蛋白质粉－华粤生物技术有限公司

投资额度

未知

公司名称

华粤生物技术有限公司

公司地址

广东省广州市从化青云路217号

业务联系

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广东华粤生物技术有限公司从成立之日起，就目标明确地立足在"生物技术、化工"专业项目的研究开发与科技创新，并积极把成熟的科研成果向社会推广，及时将科学技术转化为生产力，为国家的科研事业贡献出自己的一份力量。
　　广东华粤生物技术有限公司始终坚持科学技术、产品的创造性；尽量做到人无我有，人有我新，其独创性，新颖性始终遥遥领先国内同行企业。与华粤携手，您将始终先人一步，胜人一筹。经过我们多年的经营实践，探索出一条统一管理、分散生产、集中销售、利润分享的联营合作经营方式。公司以科技为先导，服务社会为宗旨，推广准确、真实、先进的实用技术，为广大的合作者提供无限商机。 公司免收技术转让费、技术保密费、管理费、加盟费及合作信誉金等费用，让广大联营户享受真正的零风险项目合作我公司愿为广大创业者提供一个实际、高效、成功的创业平台——农作物提取植营素、养殖螺旋藻、鸡蛋提取溶菌酶、动物血液中提取超氧化物歧化酶、大米（米水）或玉米提取蛋白质粉、大蒜生产大蒜素、血红素、胆红素、凝血酶、米糠中提取植酸、植物产纤维素等成熟技术的项目。
　　广东华粤生物技术有限公司是著名的生化产品、生物基因工程研究中心；是国内公认生化权威机构；是广东省专门指定的生化产品检验单位之一，可对各种生化产品作出准确的指标检验及免费技术指导。(欢迎产量低或失败的诚信学员，可带材料来人免费学习）若因技术问题造成你的经济损失，本公司承担一切法律责任！

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超氧物歧化酶(Superoxide dismutaee简称SOD)是一种新型酶制剂,它在生物界的分布极广,几乎从人到细胞,从动物到植物,都有它的存在。原来从牛血中制取,现多从猪血中提取,商品名为Orgotdin。它对于治疗因超氧离子(O_2~(u-))引起的各种疾病均有一定的疗效,尤其治疗类风湿关节炎、红斑痕疮,皮肌炎等均有明显效果。此外,在防辐射,防衰老,抗肿瘤等方面也已进入临床。Sod经过采血、取血球、丙酮沉淀、热处理、透析、上柱、浓缩、冷冻干燥而成。它的提取非常困难，绝对不是家庭作坊能够完成的任务，需要数百万的设备才可以。所以，SOD从动物血中提取项目均是极不可靠项目，早已被证实为

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篇三 溶菌酶鸡蛋
从鸡蛋清中提取溶菌酶

篇四 溶菌酶鸡蛋
鸡蛋清中提取溶菌酶

篇五 溶菌酶鸡蛋
一种从鸡蛋清中分离溶菌酶的方法

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利(10)授权公告号(10)授权公告号 CN 103114082 B

(45)授权公告日 2014.11.12

(21)申请号 201310069093.9

(22)申请日 2013.03.04

(73)专利权人浙江工业大学

地址310014 浙江省杭州市下城区潮王路

18号

(72)发明人张健 金志敏 夏春年 姚小武

张岩

(74)专利代理机构杭州天正专利事务所有限公

司 33201

代理人黄美娟 王兵

(51)Int.Cl.M. Sternberg和D. Hershberger.Separation of proteins with polyacrylic acids..《Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Protein Structure》.1974,审查员 孙彦珂

C12N 9/36(2006.01)

(56)对比文件

CN 1108381 C,2003.05.14,

陈若飞.从蛋壳中提取溶菌酶的研究..《沈

阳化工学院院报》.2008,

卢庆祥.用聚丙烯酸凝聚提取溶菌酶..《化

学教学》.1995,

(54)发明名称

一种从鸡蛋清中分离溶菌酶的方法

(57)摘要

本发明公开了一种从鸡蛋清中分离溶菌酶的

方法：用水将鸡蛋清溶解，调节pH至4.0～5.0

并加热至80℃左右，使杂蛋白沉淀、过滤除去，获

得滤液；再在弱酸性条件下，用木质素磺酸钠与

滤液中的溶菌酶进行聚合、沉淀；然后，将沉淀物

在碱性条件下溶解，用聚丙烯酰胺水溶液使其解

离，过滤得滤液；最后，向滤液中加入无水乙醇使

其结晶，过滤、干燥即得溶菌酶；本发明使用的原

材料价格低、工艺简单、条件温和、便于操作控制、

生产周期短，比以往的沉淀法更经济，更适合于工

业化生产。权利要求书1页 说明书5页权利要求书1页 说明书5页

CN 103114082

B

CN 103114082 B权 利 要 求 书1/1页

1.一种从鸡蛋清中分离溶菌酶的方法，其特征在于所述方法按以下步骤进行：

（1）将鲜鸡蛋清用水稀释后，搅拌均匀，调节pH值至4.0～5.0后立即加热至80～85℃，保温10～15min，水浴冷却至20～35℃后静置6～10h，过滤，获得滤液a；

（2）将步骤（1）获得的滤液a调pH值至4.5～6.5，搅拌下，缓慢加入木质素磺酸钠至有沉淀生成，静置3～9小时，过滤，取滤饼用Na2CO3水溶液溶解完全后，再缓慢加入聚丙烯酰胺水溶液至无沉淀产生，静置4～8小时，过滤，获得滤液b；所述木质素磺酸钠以质量浓度10%～20%的木质素磺酸钠水溶液的形式加入，所述木质素磺酸钠水溶液与滤液a的体积比为0.4～1.2：1；

（3）向步骤（2）获得的滤液b中缓慢加入无水乙醇至产生白色沉淀，静置，过滤，将滤饼冷冻干燥，获得所述溶菌酶。

2.如权利要求1所述的从鸡蛋清中分离溶菌酶的方法，其特征在于步骤（1）用质量浓度5%的盐酸来调节pH值。

3.如权利要求1所述的从鸡蛋清中分离溶菌酶的方法，其特征在于步骤（2）中将步骤

（1）获得的滤液a用质量浓度5%的NaOH水溶液调pH值。

4.如权利要求1所述的从鸡蛋清中分离溶菌酶的方法，其特征在于：步骤（2）中的木质素磺酸钠的相对分子量为4000～10000。

5.如权利要求1所述的从鸡蛋清中分离溶菌酶的方法，其特征在于：步骤（2）中Na2CO3水溶液的质量浓度为3～10%。

6.如权利要求1所述的从鸡蛋清中分离溶菌酶的方法，其特征在于：步骤（2）中聚丙烯酰胺水溶液的质量浓度为5%～25%。

7.如权利要求1所述的从鸡蛋清中分离溶菌酶的方法，其特征在于步骤（2）加入木质素磺酸钠的温度为15～40℃，所述加入聚丙烯酰胺水溶液的温度为15～40℃。

8.如权利要求1所述的从鸡蛋清中分离溶菌酶的方法，其特征在于步骤（2）中聚丙烯酰胺的相对分子量为300万～800万。

9.如权利要求1所述的从鸡蛋清中分离溶菌酶的方法，其特征在于步骤（3）所述加入无水乙醇的温度为15～40℃。

CN 103114082 B说 明 书一种从鸡蛋清中分离溶菌酶的方法1/5页

（一）技术领域

[0001] 本发明涉及一种溶菌酶的制备方法，特别涉及一种鸡蛋清中分离溶菌酶的方法。

（二）背景技术

[0002] 溶菌酶又称胞壁质酶或N-乙酰胞壁质聚糖水解酶，是一种能水解致病菌中黏多糖的碱性酶，具有抗菌、消炎、抗病毒等作用。溶菌酶在临床上是有效的消炎剂，在食品防腐和基因工程等方面也有广泛的应用。溶菌酶来源很广，在人、动物、植物和微生物中均有发现，其中鸡蛋清中含量最高，因此，工业生产溶菌酶常以鸡蛋为原料。

[0003] 从鸡蛋中溶菌酶的提取方法报道很多，有直接结晶法、亲和色谱法、离子交换法、沉淀法、双水相萃取、超滤法等。各种方法优缺点不一，产品的质量和生产成本也有所不同。目前，沉淀法是一种工业上应用比较成熟的提取方法，其在技术要求和生产成本上都比较好。

[0004] 其中，生吉萍等【中国食品学报，2003年增刊，10～14】用等电点沉淀法，即先将获取的蛋清液用NaCl溶液稀释，再用1mol/L的NaOH溶液将蛋清pH值调到9.5～11.0，使其接近溶菌酶的等电点，并4℃下静置，从而使溶菌酶沉淀下来。这种方法操作简单，在工业生产中可以使产品的成本大大降低。但是其生产周期较长，产率相对偏低，纯度不高，高纯度产品获取过程复杂，需要增加较多步骤。

[0005] 康旭、邓川等采用盐析沉淀法【畜牧与饲料科学，2010，31(5)，91～92】，即用pH值为6.5的磷酸盐缓冲液(PBS)将蛋清稀释5倍，在搅拌和除去杂蛋白后，用硫酸铵对上清液分级沉淀，取40％～80％饱和度部分的沉淀，得溶菌酶。得到的溶菌酶纯度达到电泳纯，其中用80％左右饱和度硫酸铵时收率最好。此法得到的溶菌酶纯度和产率都比较高，但是依旧存在沉淀速度慢及不完全的问题，因而使得溶菌酶的活性降低了很多。

[0006] 陈若飞用聚丙烯酸沉淀法从蛋壳中提取溶菌酶【沈阳化工学院学报，2008年9月第22卷第3期222～225】，在除去杂蛋白后，加入NaOH溶液调pH至6.0，加入聚丙烯酸，产生乳白色胶状物。将聚合物用Na2CO3将其溶解，并pH调至9.5，加入质量分数为5％的CaCl2液将溶菌酶聚丙烯酸解离，接着过滤得到澄清溶液。最后加入NaOH溶液调pH为10.5左右，使溶菌酶结晶析出。此法选择性好，得到的溶菌酶纯度很高，但是聚丙烯酸价格较贵，而且水溶液的黏性较大，不方便大规模生产。

[0007] 文章军和钱生球在其专利【一种分离溶菌酶的方法】中描述，以蛋清为原料，加水稀释后，搅拌均匀，用酸调pH至4.0～5.0，静置，除去沉淀，再将溶液升温至75～80℃，冷却静置，过滤得上清液，然后用碱调pH至7.5～8.0，加入乙醇至产生沉淀，静置6～10小时后过滤，干燥沉淀溶菌酶。其工艺步骤简单、生产周期短、除杂蛋白效果较好、收率也比较高，但是最后所得酶的活性不是特别高。

国外，研究者用N-异聚丙烯酰胺与丙烯酸单体的共聚物从蛋清中，【Journal of Biotechnology，87(2001)，95～107】，虽然得到的产品纯度高、收率高、活性也比较好，但是生产的成本高，而且操作十分复杂。[0008]

[0009] 溶菌酶为白色或微白色冻干粉，可溶于水，不溶于乙醚和丙酮。相对分子量在14000左右，pI在10.5～11.0，最适存在和反应的pH值为6.5。酸性介质中可稳定存在，碱性介质中易失活；96℃或pH值为3条件下，15min后活力保持87%。而蛋清中的其他蛋白的pI在4.0～5.0，在80℃以上的高温下易失活，所以，可以用等电点沉淀法除杂蛋白。由于溶菌酶的pI太高，此时采用等电点沉淀产生一定量的失活，但溶菌酶在弱碱性条件下，会在乙醇作用下结晶，所以可以用乙醇使其结晶而分离。

[0010] 此外，木质素磺酸钠可以溶解在碱性的水溶液中，而且在实验研究中发现，木质素磺酸钠可以在弱酸条件下与溶菌酶生成聚合物沉淀。所以本发明就是利用这种聚合沉淀的方法提取分离蛋清中溶菌酶。

[0011] 而聚丙烯酰胺作为水溶性高分子聚合物，具有良好的絮凝性，本身无毒副作用，且聚丙烯酰胺易与木质素磺酸盐生产凝聚物。蒋成新在研究中，有利用聚丙烯酰胺和木质素磺酸钠复合【石油钻采工艺，1988年专辑（22）2,193～202】，生成复合铬冻胶堵水剂。而本发明则是利用聚丙烯酰胺水溶液与木质素磺酸钠结合，生成沉淀，而使木质素磺酸钠和溶菌酶的聚合沉淀解离，达到得到分离。

[0012] 所以本发明使用的原材料价格低、工艺简单、条件温和、便于操作控制、生产周期短，比以往的沉淀法更经济，更适合于工业化生产。

（三）发明内容

[0013] 本发明目的是提供一种从鸡蛋清中分离溶菌酶的方法，使用的原材料价格低、工艺简单、条件温和、便于操作控制、生产周期短，比以往的沉淀法更经济，更适合于工业化生产。

[0014] 本发明采用的技术方案是：

[0015] 一种从鸡蛋清中分离溶菌酶的方法，所述方法按以下步骤进行：

[0016] （1）将鲜鸡蛋清用水稀释后，搅拌均匀，调节pH值至4.0～5.0后立即加热至80～85℃，保温10～15min，水浴冷却至20～35℃后静置6～10h，过滤，获得滤液a；

[0017] （2）将步骤（1）获得的滤液a调pH值至4.5～6.5，搅拌下，缓慢加入木质素磺酸钠至有沉淀生成，静置3～9小时，过滤，取滤饼用Na2CO3水溶液溶解完全后，再缓慢加入聚丙烯酰胺水溶液至无沉淀产生，静置4～8小时，过滤，获得滤液b；

[0018] （3）向步骤（2）获得的滤液b中缓慢加入无水乙醇至产生白色沉淀，静置（15～40℃下静置3～5h），过滤，将滤饼冷冻干燥，获得所述溶菌酶。

[0019] 进一步，步骤（2）中将步骤（1）获得的滤液a用质量浓度5%的NaOH水溶液调pH值，优选调pH值至5.5～5.8。

[0020] 进一步，步骤（2）中木质素磺酸钠相对分子量为4000～10000。

[0021] 进一步，步骤（2）中木质素磺酸钠以质量浓度10%～20%的木质素磺酸钠水溶液

1，优选0.8:1。的形式加入，所述木质素磺酸钠水溶液与滤液a的体积比为0.4～1.2：

[0022] 进一步，步骤（2）中Na2CO3水溶液的质量浓度为3～10%，优选5%。

[0023] 进一步，步骤（2）中聚丙烯酰胺水溶液的质量浓度为5%～25%，优选10～15%。

[0024] 进一步，步骤（2）加入木质素磺酸钠的温度为15～40℃，优选25℃；所述加入聚丙烯酰胺水溶液的温度为15～40℃，优选25℃。

[0025] 进一步，步骤（2）中聚丙烯酰胺的相对分子量300万～800万。

[0026] 进一步，步骤（3）所述加入无水乙醇的温度为15～40℃，优选25℃。

[0027] 本发明用造纸行业的废物木质素磺酸钠作为沉淀剂，从鸡蛋清中分离溶菌酶。首先，用水将鸡蛋清溶解，调节pH至4.0～5.0并加热至80℃左右，使杂蛋白沉淀、过滤除去，获得滤液；再在弱酸性条件下，用木质素磺酸钠与滤液中的溶菌酶进行聚合、沉淀；然后，将沉淀物在碱性条件下溶解，用聚丙烯酰胺水溶液使其解离，并与木质素磺酸盐生成沉淀，过滤得滤液；最后，向滤液中加入无水乙醇使其结晶，过滤、干燥即得溶菌酶。

[0028] 接下来进行称量和酶活力的测定，其中，酶活力的测定采用分光光度计法(即F.I.P法)。其原理是溶菌酶破坏细菌的细胞壁，从而降低细胞悬浮液的浊度，可用分光光度计法来测定这种反应。一个F.I.P溶菌酶单位相当于在规定条件下于450nm处每分钟将吸光度降低0.001所需的酶量。用以下公式（1）计算酶的活性：

[0029]

[0030] 公式（1）公式（1）中，ΔE450为450nm处每分钟吸光度的变化(El-E2)；Em为每10μL所用酶溶液中含有酶的质量，mg；0.001为一个单位每分钟内使吸光度下降0.001。

[0031] 与现有技术相比，本发明的有益效果主要体现在：本发明使用的原材料价格低、工艺简单、条件温和、便于操作控制、生产周期短，比以往的沉淀法更经济，更适合于工业化生产。

（四）具体实施方式

[0032] 下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：

[0033] 本发明所述百分浓度除特别声明外，均为质量浓度。

[0034] 实施例1

[0035] 所用鸡蛋清来自浙江省临安市昌化镇，溶菌酶含量约为3.40%，木质素磺酸钠的相对分子量约为5000，聚丙烯酰胺的相对分子量约为800万。

[0036] 取鲜鸡蛋清1.8千克，加入2.7千克蒸馏水以降低其黏度，搅拌均匀后，加入质量浓度5%的盐酸将pH调至4.0，并立即加热至80℃，并保温15min，水浴冷却至20℃、20℃下静置7小时，过滤，得滤液a；将滤液a用质量浓度5%的NaOH水溶液调pH至4.7，搅拌下，逐渐加入质量浓度15%的木质素磺酸钠水溶液至沉淀生成，木质素磺酸钠水溶液的加入量与滤液a体积比为0.4：1，在25℃静置4小时，过滤，得凝聚物沉淀（即沉淀），取沉淀用质量浓度3%的Na2CO3水溶液将其完全溶解，逐渐加入质量浓度10%聚丙烯酰胺水溶液至无沉淀产生，20℃静置6h、过滤，获得滤液b；20℃下，向滤液b中逐渐加入无水乙醇至产生白色沉淀，20℃静置3h、过滤，滤饼在-30℃下真空冷冻干燥5h，即得产品溶菌酶27.1g，以蛋清原料中溶菌酶含量计，测得所得溶菌酶收率为44.3%，活性为13509U/mg。

[0037] 实施例2

[0038] 所用鸡蛋清浙江省绍兴市，溶菌酶含量约为3.50wt%，木质素磺酸钠的相对分子量约为6000，聚丙烯酰胺的相对分子量约为600万。

[0039] 取鲜鸡蛋清1.5千克，加入2.3千克蒸馏水以降低其黏度，搅拌均匀后，加入5wt%

篇六 溶菌酶鸡蛋
鸡蛋清中溶菌酶的提取与抑菌作用

试验研究

ChinaFoodAdditives

中国食品添加剂

鸡蛋清中溶菌酶的提取与抑菌作用

黄敏,孔明航,王丽明

1

2

1

(1.长江大学生命科学学院,荆州 434025;2.湖北省国营大垸农场,大垸 433300)

摘 要:研究从鸡蛋清中提取与精制溶菌酶的方法,观察溶菌酶对大肠杆菌与金黄色葡萄球菌的抑制作用。从鸡蛋清提取溶菌酶的方法:取出鸡蛋清,过滤,用蒸馏水溶解,加氯化钠,调节溶液pH至510,加入溶菌酶晶种,

4e下静置结晶,过滤,可以得到溶菌酶粗品。将粗品溶菌酶溶解,按上述步骤溶解后结晶,重

复3次,可以精制溶菌酶。用滤纸片法观察溶菌酶对大肠杆菌与金黄色葡萄球菌的抑菌作用。结果表明,鸡蛋清溶菌酶提取的较优条件是:酶液pH1010、氯化钠加入量5%、蛋清液用2倍体积蒸馏水稀释。70e下保温5min,鸡蛋清溶菌酶的精制率最高。鸡蛋清溶菌酶对大肠杆菌与金黄色葡萄球菌有明显抑制作用,80e加热30min对鸡蛋清溶菌酶的抑菌作用影响很小。

关键词:溶菌酶;鸡蛋清;提取;抑菌作用

中图分类号:TS20112+5 文献标识码:A 文章编号:

1006-2513(2010)03-0154-04

Theextractionandantibacterialeffectof

lysozymefromhen-eggwhite

HUANGMin,KONGMing-hang,WANGL-iming

1

2

1

(1.CollegeofLifeScience,YangtzeUniversity,Jingzhou434025;2.StateFarmofDayuan,Hube,iDayuan433300)

Abstract:TheextractionandantibacterialeffectofLysozymefromHen-eggWhite(HEW)werestudied.Theex-tractionprocessoflysozymefromHEWwereasbelow:HEWweregotandfiltrated,NaClwasadded,complishedat4e,

thepHofthesolutionwasadjustedto510,

dissolvedwithdistilledwater,

thecrystallinewasac-thenlysozymeseedwasadded,

andcrudeLysozymewasgot.Thecrudelysozymewasrefinedbydissolutionandrecrystallization.

thepHofHEWsolutionwas

TheantibacterialeffectoflysozymeonEscherichiacoliandStaphylococcusaureuswasestimatedbyfilterpapermethod.TheresultsshowedthatthebetterprocessingparameterforHEWextractionwerebelow:1010,HEWwasdilutedby2timesvolumedistilledwaterand5%Staphylococcusaureus.Processingat80eKeywords:

lysozyme;

(w/vNaClHEW)wasadded.Theyieldofref-i

ningwashighestwhentempetaturekept5minat70e.HEWhadevidentantibacterialeffectonEscherichiacoliand

for30minhadnearlynoeffectonantibacterialeffectofHEW.

extraction;

antibacterialeffect

hen-eggwhite(HEW);

溶菌酶(Lysozyme,EC31211117)又称胞壁

质酶(Muramidase)、N-乙酰胞壁质聚糖水解酶(N-AcetylmuramideGlycanohydrolase),能选择性

收稿日期:

2009-05-14

地分解微生物的细胞壁而具有杀菌、抗病毒、抗

肿瘤细胞等功效,具有生物相容性好、对组织无刺激、无毒性等优点,在食品工业、医疗、生物

作者简介:黄敏(1975-),女,讲师,硕士,主要从事食品生物技术的教学与科研工作。

154

试验研究【溶菌酶鸡蛋】

学等领域有着广泛的应用

[1-3]

中国食品添加剂ChinaFoodAdditives

。操作3次,结晶经冷冻干燥后即得精制溶菌酶。11312 溶菌酶粗提取单因子试验

主要考察氯化钠的用量、蛋清稀释倍数、酶液pH对溶菌酶粗提取率的影响。试验中蛋清液的用量固定为100mL,比较氯化钠添加量为4%、5%、6%、7%;蛋清稀释倍数为1、2、3、4;酶液pH为815、915、10、1015。11313 溶菌酶粗提取条件优化

在单因子试验的基础上,选用L9(3)正交表,进行正交试验,优化溶菌酶粗提取的工艺参数表。因素水平见表。

表1 盐析法提取蛋清酶溶菌酶的因素水平表L9(33)

水平

蒸馏水添加量(倍)(因素A)

234

pH(因素B)91510101015

氯化钠加入量(%w/v)(因素C)

456

3

溶菌酶广泛存在于鸟、家禽的蛋清、哺乳动物的泪液、唾液、血浆、尿、乳汁和组织细胞

中,以蛋清中含量最为丰富。目前,多数商品溶菌酶是从蛋清中提取的

[4-6]

。本文优化从鸡蛋蛋

清提取与精制溶菌酶的工艺条件,并观察溶菌酶对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的抑制作用。

1 材料与方法

111 试验材料

鸡蛋:长江大学西校区市售的新鲜鸡蛋;大大肠杆菌(Escherichiacoli)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus):长江大学生命科学学院微生物实验室提供;

溶菌酶标准品:为鸡蛋清溶菌酶,活力\20000U/mg,上海源聚生物科技产品;

氯化钠、氢氧化钠、盐酸等为国产分析纯试剂;蛋白胨、牛肉膏、琼脂粉等为国产生化试剂。

112 试验仪器

冷冻干燥机(Alpha)、万分之一电子天平、pHS-2C精密pH计(上海雷磁仪器厂)、超净工作台、电热恒温培养箱、高压灭菌锅、平板打孔器。

123

11314 溶菌酶提取率测定

用万分之一电子天平称取冷冻干燥后溶菌酶晶体质量,减去作为晶种加入的溶菌酶质量,除以蛋清液体积。

11315 溶菌酶对大肠杆菌与金黄色葡萄球菌的抑制作用

[7-8]

113 试验方法

11311 溶菌酶的提取与精制方法

将鸡蛋两端敲洞,使鸡蛋清流出。双层纱布过滤并混匀,按蛋清体积加入蒸馏水,轻轻搅拌5min,使蛋清溶液的稠度均匀。之后向蛋清溶液中缓慢加入氯化钠细粉并轻轻搅拌。加完氯化钠后,再用氢氧化钠溶液调节pH,加入定量标准溶菌酶结晶作为晶种。4e下静置。待结晶完全后,用布氏漏斗滤出结晶,即得到粗制的溶菌酶晶体。

将制得的粗品结晶溶于适量的蒸馏水中,调节酶液的pH至510,静置2h,过滤除去不溶物,收集起滤液并量出其体积,慢慢加入氯化钠细粉,用氢氧化钠溶液调节酶液pH至等电点,向酶液中加入定量标准溶菌酶晶种,4e静置结晶。待结晶完全后,用布氏漏斗滤出结晶。重复上述

采用滤纸片法。用打孔器打出直径5mm滤纸圆片,高压灭菌。分别吸取011mL大肠杆菌与金黄色葡萄球菌菌悬液加在已倒好的牛肉膏蛋白胨

平板培养基表面,涂布均匀。用无菌镊子夹取已在溶菌酶溶液中浸渍30min滤纸片,放到上述含菌平皿上,每皿三片,于37e恒温培养24h后取出,量取抑菌圈直径,取其平均值作为实验结果。

2 结果与分析

211 蛋清液稀释倍数对溶菌酶粗提取率的影响

固定pH为1018,氯化钠的添加量为蛋清溶液体积的5%(w/v,以下同),在4e下静置1w结晶,分别加入蛋清体积1、2、3、4倍的蒸馏水,提取溶菌酶的结果见图1。

由图1可见,蛋清液加入1倍体积蒸馏水稀

155

试验研究

ChinaFoodAdditives

钠加入量以5%左右为宜。

214 蛋清溶菌酶粗提取条件的优化

按表1的因素水平,进行正蛋清溶菌酶提取的正交试验,结果间表2。

表2 蛋清溶菌酶提取正交试验结果

试验号

蒸馏水添加量(A)

111222333130011991149151

酶液pH(B)123123123111413241210210

氯化钠加入溶菌酶粗提取率量(C)

123231312113711981313176

(mg/100mL)

352488460356447396406389354

中国食品添加剂

图1 水加入量对溶菌酶粗提取率的影响

12

释,溶菌酶提取率比其他稀释倍数的低很多,正交试验可不考虑这一稀释倍数。

212 酶液pH值对溶菌酶粗提率的影响

固定蒸馏水添加量为蛋清体积的2倍,氯化钠加入量为蛋清溶液的5%,在4e下静置1w结晶,分别调节酶液pH为815、9、915、10、1015,测得溶菌酶粗提取率的结果见图2。由图2可见,酶液pH可选915、1010、1015作为正交

试验的条件。

3456789K1K2K3R

图2 氯化钠加入量对溶菌酶粗提取率的影响

对表2数据进行方差分析,结果表明3个因素对蛋清溶菌酶粗提取率的影响均达到显著水平(Pr>015)。从表2看,A1B2C3下溶菌酶的粗提

取率最高。但考虑氯化钠加入量超过5%后,溶菌酶呈胶状,易裹带杂质,不利于精制,故确定A1B2C2,即蛋清液用2倍体积蒸馏水稀释、酶液pH调节至1010、氯化钠加入量为5%作为提取蛋清溶菌酶的条件。

215 热处理时间对溶菌酶精制率的影响按214优化的条件提取溶菌酶,取粗制冻干溶菌酶1g加入到20倍质量的5%氯化钠水溶液中,用盐酸溶液调pH415,离心除去不溶沉淀,

213 氯化钠对溶菌酶粗提的影响

固定酶液pH为1010,添加蒸馏水的量为蛋清的2倍,在4e条件下静置1w结晶,氯化钠加

入量分别为4%、5%、6%、7%,测定溶菌酶粗提取率的结果见图3

。

图3 氯化钠加入量对溶菌酶粗提取率的影响

由图3可见,氯化钠加入量越大,溶菌酶的粗提取率越高,但氯化钠加入量超过5%后,溶菌酶呈胶状,易裹带杂质,不利于精制。故氯化

升温到70e,水浴中分别保温5、10、15、20、

25、30min,过滤,调pH1010,冷却至4e下结晶,蛋清溶菌酶精制率如图4所示。由图可见,70e下保温5min最有利于蛋清溶菌酶的精制。

156

试验研究

中国食品添加剂ChinaFoodAdditives

216 溶菌酶对大肠杆菌与金黄色葡萄球菌的抑制图5清楚地显示蛋清溶菌酶对大肠杆菌与金黄色葡萄球菌具有抑制作用。

将溶菌酶液pH调至610,一组在80e加热30min,一组不加热,测定对大肠杆菌与金黄色葡萄球菌抑制作用产生抑菌圈直径的结果见表3

。

图4 保温时间对溶菌酶精制率的影响

图5 蛋清溶菌酶对大肠杆菌与金黄色葡萄球菌的抑制

表3 蛋清溶菌酶对大肠杆菌与金黄色葡萄球菌产生的抑制圈直径(mm)

菌种类

酶处理未处理酶热处理酶未处理酶热处理酶

对照0000

0110%溶菌酶131287

0125%溶菌酶171311110

0150%

1100%

溶菌酶溶菌酶19151211

19181312

(3)鸡蛋清溶菌酶对大肠杆菌与金黄色葡萄球菌存在明显抑制作用,溶菌酶浓度越高,对这2种菌的抑制作用越强。80e加热30min对鸡蛋清溶菌酶的抑菌作用影响不大。

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大肠杆菌金黄色葡萄球菌

由表可见,抑菌圈直径与溶菌酶浓度存在相

关性,表现为:溶菌酶浓度越高,对金黄色葡萄球菌与大肠杆菌抑制作用越强。热处理溶菌酶与未经热处理溶菌酶对2种菌产生的抑菌圈直径差别不大,说明溶菌酶耐热性较强。

3 结论

(1)溶菌酶的稀释倍数、酶液pH与氯化钠加入量对鸡蛋清溶菌酶粗提取率有显著影响。从鸡蛋清提取溶菌酶的合适条件为:蛋清液用2倍体积蒸馏水稀释、酶液pH调节至1010、氯化钠加入量为5%作为提取蛋清溶菌酶的条件;(2)70e下保温的时间对鸡蛋清溶菌酶的精制率有影响,较佳的保温时间为5min;

157

篇七 溶菌酶鸡蛋
测定鸡蛋蛋清中溶菌酶含量和活力标准方法的建立

2010年第46卷第3

期

AnimalProduction·动物生产

测定鸡蛋蛋清中溶菌酶含量和

活力标准方法的建立

侯启瑞，王金玉*，谢凯舟，戴国俊，刘大林（扬州大学动物科学与技术学院，江苏扬州

摘

225009）

要：研究测定鸡蛋蛋清中溶菌酶含量和活力的标准方法。在比浊法的基础上，用紫外-可见分光光度计测定

准确度、灵敏度和可重复性进行验证。结果表明：本方法鸡蛋蛋清中溶菌酶的含量和活力，并对该方法的精密度、LOD0.3μg/mL的精密度（RSD＜4%）、准确度（R＞95%）、灵敏度（LOQ5μg/mL，）、可重复性（RSD＜7%）均符合方法评估实验要求，所测鸡蛋蛋清溶菌酶含量为2.93~4.07mg/mL、活力为13832.54~20842.74U/mg。研究证明，本方法能科学地估计蛋清中的溶菌酶含量和活力，是一种操作性强、易于掌握、结果可靠稳定的测定方法，可以作为测定鸡蛋蛋清中溶菌酶含量和活力的标准方法。关键词：蛋清；溶菌酶；溶壁微球菌；酶活力TS201.2+5中图分类号：S831.5；

文献标识码：B

0258-703303-0049-04文章编号：（2010）

溶菌酶（lysozyme）是一种能够水解细胞壁成分中N-乙酰胞壁酸与N-乙酰葡萄糖胺之间的β-1，4糖苷键的酶，被广泛应用于医药、食品工业、生物工程等方面，现从鸡蛋蛋清中提取溶菌酶已达到工酶活业化生产水平[1]。蛋清中的溶菌酶含量越高，力越强，越有利于鸡蛋的保存，因此测定鸡蛋蛋清中的溶菌酶对我国溶菌酶生产、禽蛋产品加工有重要的指导作用，也为蛋品质评定提供了一个重要参数。对溶菌酶的研究始于20世纪初，英国细菌学家弗莱明[2]在1922年发现人的鼻涕、唾液、眼泪有强大的溶菌活性，并把其溶菌作用的因子命名为溶菌酶。此后研究者在人和动物的多种组织、分泌液及某些植物、微生物中也发现了溶菌酶的存在，其中鸡

[3]

蛋蛋清的溶菌酶含量最高（约含0.3%）。鸡蛋蛋清

国外多用比浊法测定溶菌酶活力。本研究在比浊法的基础上，针对鸡蛋蛋清中溶菌酶的含量和活力设计出一套系统的测定方法，为蛋清中的溶菌酶测定提供一个标准方法，规范我国禽蛋中溶菌酶的测定。11.1

材料与方法材料

鸡蛋蛋清溶菌酶（20000U/mg）购自美

国Sigma公司；溶壁微球菌（M.Lysodeikticus）购自中国科学院微生物研究所，菌种编号1.634；其他试剂均为分析纯级。1.21.2.1

溶菌酶含量的测定标准曲线的制备

溶菌酶用0.9%氯化钠稀

0.2、0.4、0.8、1mg/mL释成不同梯度浓度（0、），以溶281nm波长处吸光度为菌酶工作液浓度为横坐标，

纵坐标绘制标准曲线，并求出回归方程。1.2.1

蛋清溶液的测定

蛋清用0.9%氯化钠稀释，

77℃水浴10min后取出，乙酸调溶液至pH4.5，静置1h。离心取上清，按照标准曲线绘制的操作测得OD281值，由标准曲线回归方程计算蛋清溶液中溶菌酶的含量（C），再乘以稀释倍数即为蛋清中溶菌酶。的含量（P）1.31.3.1

溶菌酶活力的测定底物的制备

溶壁微球菌用0.2mol/LpH

已成为溶菌酶生产的主要原料，但是蛋清中溶菌酶的定量测定还没有一个较便捷的方法，传统的方法再测定提取液中的蛋是先提取蛋清中的溶菌酶[4]，

白含量[5]。由于不可能完全提取出蛋清中的溶菌酶，这种方法计算出的蛋清溶菌酶含量往往比实际的数目前，国内常用值小。溶菌酶活力的测定方法很多，

———————————————————————————

的有琼脂板扩散法、比色法、高效液相色谱法等，而

2009-03-05；2009-08-28收稿日期：修回日期：基金项目：国家标准（20079762-T-326）

作者简介：侯启瑞（1983-），女，河南开封人，博士研究生*通讯作者

6.2磷酸盐缓冲液悬浮，调至OD450在1.3左右，2~8℃放置。

动物生产·AnimalProduction

1.3.2

蛋清溶液的测定

将蛋清溶液、菌液于25℃

水浴中保温，反应体系见表1。记下反应15s和75s时的读数A1、

A2。按每分钟OD450值下降0.001为1个活力单位（U）的定义[6]，蛋清中每毫克溶菌酶的活力用以下公式计算：

酶活力（U/mg)=

△E450

式中，

△E450为450nm波长处吸光度A1、A2之差；C为蛋清溶液中溶菌酶的含量（μg/mL）。

表1

蛋清溶液测定反应体系

mL

测定管

空白管

蛋清溶液0.2-底物

1.0-磷酸盐缓冲液（pH6.2）

-

1.2

1.4精密度、准确度和灵敏度试验参照文献[7]。

1.5重复性试验

蛋清重复样5个，按照1.2和

1.3的测定方法分别测定。

1.6

伊萨鸡蛋和京海黄鸡蛋蛋清中溶菌酶的测定伊萨鸡蛋30枚，京海黄鸡蛋30枚，按照1.2和1.3的方法分别测定。1.7

统计分析

用软件SPSS11.0统计各指标均值

和方差，并运用GLM程序的方差分析对伊萨鸡蛋和京海黄鸡蛋蛋清溶菌酶含量和活力进行比较。2结果与分析2.1

溶菌酶标准曲线

溶菌酶溶解后经紫外-可

见分光光度计检测，在281nm波长处出现峰值。配制不同梯度浓度溶菌酶溶液，每毫升溶液中的溶菌酶含量与281nm波长处吸光度呈线性关系，标准曲线图形见图1，标准曲线回归方程为Y=2.4429X+0.0149，R2

=0.9998。

图1

溶菌酶标准曲线

2.2精密度、准确度和灵敏度试验结果2.2.1

精密度

精密度一般用相对标准差RSD（即

变异系数CV）表示，RSD越低，则表示方法精密度

2010年第46卷第3【溶菌酶鸡蛋】

期

越好。低、中、高3种浓度（3种浓度蛋清溶液是依据稀释倍数不同，本研究低浓度蛋清稀释了70倍，中浓度蛋清稀释了20倍，高浓度蛋清稀释了10倍）的蛋清溶液中溶菌酶含量的日内（上午、下午和晚上）和日间（不同日的同一时间）测定结果见表2和表3，其中日内RSD<3%（2.01％、2.08％、0.80％），日间RSD<4%（3.18％、2.36％、1.46％），3种浓度蛋清溶液的溶菌酶含量测定值日内RSD均小于日间RSD。

表2

日内精密度(n=3)

μg·mL-1浓度分组时间

低浓度

中浓度

高浓度

测定结果

09:3038.65159.14279.2614:3039.91156.77277.2519:30

38.47163.32274.8539.01159.74277.12SD

0.78

3.32

2.21表3

日间精密度(n=5)

μ·mL-1浓度分组时间

低浓度

中浓度

高浓度

测定结果

9月1日39.91156.77277.259月2日39.18158.47283.379月3日38.45164.94278.559月6日36.87156.26271.979月7日

37.55155.93277.6338.39158.47277.75SD

1.22

3.74

4.06

2.2.2准确度通过已知量溶菌酶标准品在蛋清

溶液中的加样回收试验，用溶菌酶的回收率（R＝M-P）

/A×100％其中，M为测得溶菌酶量；M-P为回收溶菌酶量）表示方法的准确度，回收率越接近100%，表示方法准确度越高。以蛋清溶液（由1.2测得P为197.35μg/mL）为溶剂配制200、400、600μg/mL溶菌酶溶液，添加回收率计算结果见表4，3种浓度溶菌酶的添加回收率都在95%以上。

表4

溶菌酶添加回收率

A/（mg·mL-1）

M/（mg·mL-1）M-P/（mg·mL-1）

R/%200390.16192.8196400

589.43392.0898600

787.71

590.36

98

2.2.3灵敏度灵敏度用最低定量浓度（定量限

LOQ）和最低检测浓度（检测限LOD）2项指标表示。配制一系列低溶菌酶浓度溶液，对每种浓度取样4

（

2010年第46卷第3

期

次进行测定，定量限测定结果见表5，当酶浓度降低到4μg/mL时，

相对误差E>20%，因此本方法测定溶菌酶含量的定量限为5μg/mL。以蛋清溶液为溶剂配制一系列低浓度的溶菌酶溶液，蛋清溶液为空白调零，检测限测定结果见表6，当溶菌酶浓度低于0.3μg/mL时，吸光度值不稳定，因此本方法测定溶菌酶含量的检测限为0.3μg/mL。【溶菌酶鸡蛋】

表5

最低定量浓度

μg·mL-1

溶菌酶浓度654测得酶浓度

5.474.122.895.724.103.115.534.133.225.46

4.092.91均值5.554.113.03RSD2.180.445.27E

7.587.80

24.19

表6

最低检测浓度

溶菌酶浓度（μg·mL-1

)

OD2810.60.00080.40.00050.3

*

注：*表示测定吸光度值不稳定

2.3重复性检验结果测定方法是否稳定用重复

样的相对标准差来表示，RSD越小，测定结果越一致，证明测定方法越稳定。蛋清重复样1~5的溶菌酶含量和活力测定结果见表7。重复样的溶菌酶含量RSD为3.03%，活力RSD为6.17%，即本方法所测蛋清溶菌酶含量和活力的RSD都小于7%。

表7蛋清重复样的溶菌酶含量和活力测定结果蛋清

溶菌酶含量/（mg·mL-1）

溶菌酶活力/（U·mg-1）

13.5015403.6423.6816558.9733.5915579.5243.7117724.2353.4617274.563.5916508.18SD

0.11

1018.71

2.4伊萨鸡蛋和京海黄鸡蛋蛋清中溶菌酶的测定结果

2个品种鸡蛋蛋清溶菌酶含量和活力的测定

结果见表8。本试验所测伊萨鸡蛋和京海黄鸡蛋蛋清溶菌酶平均含量分别为3.47、3.71mg/mL，蛋清溶菌酶平均活力分别为16183.74、15689.35U/mg。伊萨鸡蛋较重（P<0.01），蛋清溶菌酶含量显著低于京海黄鸡

AnimalProduction·动物生产

蛋蛋清溶菌酶含量（P<0.05）；伊萨鸡蛋蛋清溶菌酶活力略高于京海黄鸡蛋蛋清溶菌酶活力，（P>0.05

）。表8伊萨鸡蛋和京海黄鸡蛋蛋清溶菌酶含量和活力测定结果

鸡蛋蛋重/（g·枚-1）

溶菌酶含量/溶菌酶活力/

（mg·mL-1）

（U·mg-1）

伊萨鸡蛋61.22A3.47b16183.74京海黄鸡蛋47.34B3.71a15689.35

集合标准误

0.0310.0181.05P

＜0.0001

0.044

0.729

注：同列数据肩标不同小写字母表示差异显著（P<0.05），不同大写字母表示极显著（P<0.01）

3讨论

3.1

溶菌酶含量的测定

测定鸡蛋蛋清中的溶菌

酶含量的传统途径是先提取再测定，从蛋清中分离纯化溶菌酶已有不少报道[8,9]，虽然正交试验的酶回收率可达94%，

但是再精确的提取途径也无法完全提取出蛋清中的溶菌酶[10]。本方法测定蛋清中的溶菌酶含量精密度（RSD<4%）、准确度（R>95%）、灵敏度（LOQ5μg/mL，

LOD0.3μg/mL）、可重复性（RSD<7%）均符合方法评估实验要求，所测2个品种鸡蛋蛋清溶菌酶含量（2.93~4.07mg/mL）与相关研究结果基本一致[11]，

且本方法测定过程不涉及提取，测定周期短，对酶的活力影响小。3.2

溶菌酶活力的测定

酶的活力表示为特定条

件下单位时间内转化底物的速度，试验过程中，每5s记录1次测定管的吸光度值，在15s至75s之间测定管吸光度值以稳定速度下降，因此单位时间选择为15s至75s，该时间段的选择在文献[12]中亦有描述。2个品种鸡蛋蛋清溶菌酶活力测定结果（13832.54~20842.74U/mg）与以往研究一致[10,12]。溶菌酶活力的测定方法很多，其中比浊法是一直沿用至今的经典方法[13]，本方法借鉴了前人在比浊法上的研究成果，改进酶活力的测定条件，缩短了测定时间1min）

，运用本方法大批量、不定时测定蛋清中的溶菌酶活力时，为了节省每次测定培养溶壁微球菌的时间，可以把培养好的溶壁微球菌用20%的甘油作为保护剂，放入冰箱-20℃下保存，每次测定时称取少许菌和甘油的混合物制成底物即可使用。4

结

论

本方法用紫外-可见分光光度计，在不需要提

（

动物生产·AnimalProduction

取溶菌酶的情况下直接测定蛋清中的溶菌酶含量，测定周期短，对酶活力影响小，方法稳定可靠；改进了经典比浊法酶活力的测定条件，缩短了测定时间，尤其在大批量、不定时测定鸡蛋蛋清中的溶菌酶活力时，减少测定成本。本研究为家禽蛋清中溶菌酶易于掌握、结果可靠稳的测定提供了一套操作性强、

定的方法，本测定鸡蛋蛋清中溶菌酶含量和活力的方法已通过国家农业部和全国畜牧业标准化技术委员会审定，作为国家推荐性标准编入国家标准目录。

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!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!（上接第35页）

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EffectsofChineseHerbAdditivesonGrowthPerformanceandIntestinalMicrofloraofWeanedPiglets

WUChao1,ZhangLi1,WUYue-ming1*,LIUJian-xin1,LICai-yan1,HuaWei-dong2

(1.Keylaboratoryformolecularanimalnutritionofministryofeducation,ZhejiangUniversity,Hangzhou310029;2.InstituteofAnimalSciencesandVeterinaryMedicine,ZhejiangAcademyofAgriculturalSciences,Hangzhou310021)

Abstract:TostudytheeffectsofChineseherbsasfeedadditivesongrowthperformanceandintestinalbacterialdiversity

onpiglets.135weanedpiglets(Duroc×Landrace×Yorkshire)wereusedina28-daygrowthtrial.Thepigletswereallocatedtofivedietarytreatmentsinarandomizedcompleteblockdesign.Thedietarytreatmentswerecontrolgroup(basaldiets);treatmentsofⅠ,Ⅱ,Ⅲ,adding0.5%，1.0%and2.0%ofherbextractintothebasaldiets;antibioticgroup,adding20mg/kgColistinSulfateand100mg/kgBacitracinZincintothebasaldiet.Theresultsshowedthat:comparingtothecontrolgroup,supplementationwithherbadditivesdecreasedthediarrheaby47.6%,51.2%and45.2%（P<0.05）,andnosignificantdifferenceintheantibioticgroup（P>0.05）.PCR-DGGEDNAprofilesoftheV6-V8regiongeneof16SrDNAofmicrobiotainrectumindicatethedegreeofsimilaritiesofChineseherbgroupswereexceeding60%,thehighlevelsofdiversitywerefoundin0.5%herbgroup;Thesebandsindicatingwitha-cobservedinherbgroupsshowedexceeding90%similaritywithknownsequencesofGenbank.

Keywords:Chineseherbadditives;growthperformance;diarrhea;intestinalmicroflora;weanedpiglet

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