酶的曲线讲解

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酶的曲线讲解篇一：解读与酶有关的图表曲线题

解读与酶有关的图表曲线题

《酶》这一节内容在高考考试说明中要求是Ⅱ，理解所列知识与相关知识之间的联系与区别，并能在复杂的情景中综合运用其进行分析、判断、推理和评价。高考考纲要求理解酶的概念和酶的特 性，同时考察曲线分析和实验设计能力。以 图表形式考察酶的特性及以酶的实验为背 景考察实验探究能力是高考命题的热点。在二轮复习的过程中，引导学生运用所学知识做好相关图表题是这一部分的一个难点。现在笔者通过归类整理，对其进行解读分析。

一．用坐标曲线反映酶的作用特性。

1.酶具有催化作用，且有高效性

图1

表示酶催化作用、高效性的曲线的解读

（1）催化剂可加快化学反应速率，与无机催化剂相比，酶的催化效率更高。

（2）酶只能缩短达到化学平衡所需时间，不改变化学反应的平衡点。

（3）酶只能催化已存在的化学反应（图1）。

例1. 根据下图所示过氧化氢被分解速度的曲线，说明酶的哪一特（ ）

①专一性 ②高效性 ③催化特性 ④在温和条件下进行

图2

A. ①④ B. ②③ C. ①② D. ③④

【解析】由图可知，加入过氧化氢酶，过氧化氢分解速度快于未加酶和加入Fe3+的，说明酶具有高效的催化特性。欲验证酶的专一性，可利用同一种酶催化不同的底物或用同一种底物不同的酶，题图中只显示一种酶，一种底物，因而不能说明酶具有专一性。图中没有反应条件的描述，因而也无法说明酶促反应在温和条件下进行。

答案：B。

2.酶的专一性曲线

图3

酶的专一性曲线的解读

加入酶B反应速率与无酶A条件下的反应速率相同，而加入酶A反应速率随反应物浓度的增大而明显加快，说明酶B对此反应无催化作用，进而说明酶具有专一性（图3）。

3.温度、PH对酶活性的影响曲线

图4

表示影响酶活性曲线的解读：

酶的活性是指酶催化一定化学反应的能力。酶促反应速率可用单位时间内、单位体积中反应物的减少量或产物的增加量来表示。酶活性的高低可用一定条件下酶促反应速率来表示，但两者是有区别的。两者的关系如图4所示。

（1）在一定温度（或pH）范围内，随温度（或pH）的升高，酶的催化作用增强，超过这一范围催化作用减弱。

（2）过酸、过碱、高温都会使酶失活，而低温只是抑制酶的活性，酶分子结构未破坏，温度升高可恢复活性。

（3）反应溶液酸碱度的变化不影响酶作用的最适温度

（4）激活剂可以提高酶的活性，但不是酶活性必需的；抑制剂使酶活性下降，但不使酶变性。两者都不改变曲线的形状，且没有酶存在时都不起作用。

例2 下图中，（甲）表示植物的淀粉酶和人的淀粉酶的活性与pH的关系，（乙）表示三种脱氢酶（A、B、C）的活性受温度影响的状况。下列说法正确的是（ ）。

图5

①pH为5时，植物淀粉酶的活性最高 ②若细胞质由中性变成酸性，人的淀粉酶的活

性渐渐升高 ③（乙）中，适宜温度范围最广的酶是B ④（乙）中，无法确认C酶作用的最适温度

A. ①② B. ①③ C. ①④ D. ②③

【解析】 由图甲可知，PH为5时，植物淀粉酶的活性最高，①对；PH为7时，人的淀粉酶的活性最高，由中性变成酸性，人的淀粉酶的活性逐渐降低，直至变性失活，②错；由图乙可知，B酶适宜温度的范围最窄，③错；由于C酶活性仍在随温度的升高而升高，因此无法确认C酶作用的最适温度。

答案：C

二.影响酶促反应速率的因素

1.酶浓度对酶促反应速率的影响曲线

例题3：将萝卜磨碎制得提取液，取少量分别加入pH3～9

的盛等量过氧化氢（H2O2）溶液的几个试管中，保持30℃的

温度，结果每个试管都产生气体。重复上述实验，只是提取液

的添加量减半。两次实验过氧化氢含量的变化曲线如右图，请

回答：

（1）萝卜提取液中含有的物质是 _______ 。

（2）为什么曲线A和B中过氧化氢的含量最低点位于同一

直线上？

（3）A是第_______次实验，理由是 _______ 。

（4）如果把提取液进行加热处理，处理后进行第三次实验，

结果是_______ 。说明 _______ 。 图6

【解析】从题干信息可知，过氧化氢（H2O2）溶液中加入萝卜磨碎制得提取液，有气体产生，可知其提取液中有过氧化氢酶；从表格信息可知A、B曲线过氧化氢相对值最低都是7，可以知道PH值为7时酶的催化作用最高，A曲线最低点比B曲线高，根据题干信息可知，A是第二次实验，提取液的添加量减半，即其中的酶减少了一半，过氧化氢的分解量也相应减少。如果把提取液进行加热处理，处理后进行第三次实验，高温使酶变性而失活，结果是不反应。

答案：（1）过氧化氢酶（2）PH值为7时酶的催化作用最高（3）2 因为酶减少了一半，过氧化氢的分解量也相应减少（4）不反应 高温使酶变性而失活（每空2分）

2底物浓度对酶促反应速率的影响曲线

例题4：将一个土豆(含有过氧化氢酶)切成大小和厚薄相同的若干片，放入盛有一定体积和浓度的过氧化氢溶液的针筒中(如下图7所示)，以探究酶促反应的相关问题。根据实验现象与数据分析答题。

图7 图8

(1)若土豆片为4片时，每隔5分钟收集一次数据，根据数据绘制出如下曲线图8。

20

分钟后，气体量不再增加的原因是 _______ 。 。

(2)若土豆片为8片时，和上述实验所得的曲线(实线)相比，实验结果的曲线最可能是下列 _______ 图中的虚线。如果要获得更多的气体，在不改变溶液体积的条件下，可采取的方法是 _______。其结果可用 _______ 图中的虚线表示。

图9

(3)为保证上述实验的科学性，需要控制的其他外界因素有

【解析】（1）土豆片中含有过氧化氢酶，能将过氧化氢催化分解产生水和氧气而出现气泡，20分钟后气体不在增加，说明过氧化氢已经被完全分解，即给的过氧化氢的量有限；（2）增加土豆片的数量后，酶量增加，反应速度加快，但是酶只能改变反应的速度，不能改变反应结果，因此会出现如图c表示的结果；要获得更多的气体，则必须增加反应底物的量，又不改变溶液的体积，因此只能增加过氧化氢的浓度；其结果是气体总量增加，而图中只有a的气体量增加；（3）为了保证实验的科学性，实验变量一定为单一变量，因此必须控制其他外界因素对实验的影响，而酶的活容易受温度影响，因此必须控制好温度；气体的产生受气压影响，也应该控制好气压不变。

答案：（1）过氧化氢量有限 （2）c 增加过氧化氢浓度 a （3）温度（或温度或气压等）

2.3.酶活性对酶促反应速率的影响

例题5、.某小组在完成探究“温度是否会影响酶的活性”这个实验后提出一个问题：“酶活性受温度影响示意图”是否真的如教材所示，呈规则的、左右对称的抛物线呢？希望通过定量实验进行探究。以下是小组内同学们的讨论：

甲同学提出：可通过测单位时间内反应物的消耗量来测定酶的反应速率；

乙同学提出：先用酒精灯加热来制造高温条件，用排水法记录反应速率，实验装置如图1； 丙同学指出乙同学提出的实验方案有不合理的地方，温度过高酶会失活。他经过重新思考，定出了新的实验方案：先让酶由低到高预热成系列温度梯度，并与之相对应地加入过氧化氢，用排水法记录反应速率，实验装置如图2。

请回答： （1）你认为甲同学的方案是否可行？ _______ ，因为 _______ 。

（2）小组采用了丙同学的实验方案，用系列温度梯度进行实验，得出不同温度下的反应速率，结果见下表：

请你根据上表数据，在坐标图中绘出酶活性受温度影响的曲线图。

（3）若用新鲜土豆研磨液代替上述新鲜猪肝研磨液，能否会出现

上述表格中类似的数据？

（4）以上实验说明酶的催化作用需 _______ 。

（5）本实验得出的结论是 _______ 。

【解析】1、甲同学方案不可行因为H2O2分解可产生H2O和

O2无法测定H2O2的消耗量。2、绘图时应先将横纵坐标的含义

标明然后描点连线连成一条平滑的曲线。3、土豆中的H2O2酶类

似于猪肝研磨液中的H2O2酶均具有最适pH因此若用新鲜土豆研

磨液也会出现类似表格中的数据。4、据表可知酶的催化作用需要

适宜的温度。5据绘制的曲线不难判断过氧化氢酶活性受温度影

响不像教材所画的那样是规则、对称的抛物线。

答案1、不可行 不具有可测性2、如图10所示 图10

3、会4适宜的温度5过氧化氢酶活性受温度影响不像教材所画的那样是规则、对称的抛物线

2．4.化合物（重金属）对酶促反应的影响

酶的曲线讲解篇二：《物质的运输方式》和《酶》的曲线分析

酶的曲线讲解篇三：与酶相关的曲线

与酶相关的曲线

1 有一种酶促反应P+Q→R，用下图中曲线E表示在没有酶时此反应的过程。在时，将催化此反应的酶加于反应混合物中，图中能表示此反应进行过程的曲线是（[P]、[Q]、[R]）分别代表P、Q、R的浓度（ ）

A. 曲线A B. 曲线B

C. 曲线C D. 曲线D

2 下图纵轴为酶反应速度，横

轴为底物浓度，其中正确表示酶量

增加1倍时，底物浓度和反应速度

关系的是（ ）

3 根据下图所示过氧化氢被分解速度的曲线，说

明酶的哪一特性（ ）

①专一性 ②高效性 ③催化特性 ④在温

和条件下进行

A. ①④ B. ②③

C. ①② D. ③④

4 下图中，（甲）表示植物的淀粉酶和人

的淀粉酶的活性与pH的关系，（乙）表示三种

脱氢酶（A、B、C）的活性受温度影响的状况。

下列说法正确的是（ ）。

①pH为5时，植物淀粉酶的活性最高 ②

若细胞质由中性变成酸性，人的淀粉酶的活性渐渐升高 ③（乙）中，适宜温度范围最广的酶是

B ④（乙）中，无法确认C酶作用的最适温度

A. ①② B. ①③ C. ①④ D. ②③

5 下图甲表示温度对淀粉酶活性的影响，下图乙表示将一定量的淀粉酶和足量的淀粉混合后，麦芽糖的积累量随温度变化的情况。下列说法不正确的是（ ）

A. 图甲中表示淀粉酶催化该反应的最适温度

B. 图甲中在、时淀粉酶催化效率都很低，但

对酶活性的影响有本质的区别

C. 图乙中和的曲线表明随着温度的升高，麦芽

糖的积累量不再上升，酶的活性已达到最高

D. 图乙中A点对应的温度为。

6．图中能表示动物肌肉细胞内ATP产生量与O2供给之间的曲线是

（ ）

A．a B．b C．c D．d

7．下图表示某有机物加入某种酶后在0～80 ℃的环境中，有机

物的分解总量与温度的关系图，依图判断，在0～80 ℃环境中，

酶的活性变化曲线（pH适宜）正确的是（ ）

8.下图表示某种植物的非绿色器官在不同氧浓度下O2吸收量和CO2释放量的变化，请据图回答：

（1）外界氧浓度在10％以下时，该器官的呼吸作用方

式是 。

（2）该器官CO2的释放与O2的吸收两条曲线在P点相

交后则重合为一条曲线，此时该器官的呼吸作用方式

是 。

（3）当外界氧浓度为4％～5％时，该器官CO2释放量

的相对值为0.6，而O2吸收量的相对值为0.4。此时，无

氧呼吸消耗葡萄糖的相对值约相当于有氧呼吸的

倍；释放的能量约相当于有氧呼吸的 倍；形成ATP的数量约相当于有氧呼吸的 倍。 Cbbca bb

（1）有氧呼吸和无氧呼吸（2）有氧呼吸（3）1.5，0.1，0.07

酶的曲线讲解篇四：第7讲-酶

酶的曲线讲解篇五：酶-课堂讲案

班级： 姓名： 小组：

第一节 降低化学反应活化能的酶

课中探究案

重点：1、酶的作用和本质

难点：1、酶降低化学反应活化能的原理

2、确定和控制对照实验中的自变量和无关变量，观察和检测因变量的变化。 一、酶的作用和本质

实验：比较过氧化氢在不同条件下的分解 1、实验原理：

2、探究过程：

探究一：酶和无机的催化剂相比有什么特殊之处 （1）、2号管现象与1号管不同，说明了什么？

（2）、3号和4号管并未加热，也有大量气泡产生，说明什么？

（3）、4号比3号气泡更多，说明什么？体现了酶的什么特点？

探究二：酶的催化效率为什么比无机催化剂更高

在20℃测得的H

分解的活化能

2、为什么酶比无机催化剂催化效率更高？

结论：酶的作用： 。 探究3：实验中的相关变量

跟踪训练： 下列有关酶的作用的叙述正确的是 ( )

A. 酶是一种生物催化剂,可以降低反应的活化能,使所有反应都能进行 B. 酶是一种生物催化剂,和一般的无机催化剂相同 C. 酶是一种生物催化剂,与无机催化剂一样反应前后不变 D. 生物体内的酶不易受体内环境条件的影响

二、酶的本质

探究四：酶的本质到底是什么？如何设计实验证明?

(1)证明某种酶是蛋白质

实验组：待测酶液＋ →是否出现 反应。 对照组：已知蛋白液＋ →出现 反应。 (2)证明某种酶是RNA

实验组：待测酶液＋ →是否呈现 反应。 对照组：已知RNA溶液＋ →出现 。

小结：酶的本质： 。 跟踪训练：关于的酶的化学本质的说法，正确的是 （ ） A. 绝大多数酶是蛋白质，少数酶是RNA B. 有的酶是蛋白质，有的是固醇 C. 德国化学家毕希纳证明酶是一种蛋白质 D. 巴斯德证明少部分酶属于RNA

三、酶的特性

1、高效性：表示酶高效性的曲线

(1)催化剂可加快化学反应速率，与无机催化剂相比，酶的催化效率 。 (2)酶只能 达到化学平衡所需时间， 化学反应的平衡点。 (3)酶只能催化 的化学反应。 2、专一性： a、实验原理：

b、实验程序

c、曲线分析

(1)在A反应物中加入酶A，反应速率较未加酶时明显加快，说明 。

(2)在A反应物中加入酶B，反应速率和未加酶时相同，说明 。 3、酶的作用条件温和

（1）．温度对酶活性的影响 a、实验原理

b、实验设计思路

C、实验设计程序

d、实验的变量分析

（2）pH对酶活性的影响 a、实验原理

C、实验的变量分析

d、影响酶活性的曲线

(1)甲、乙曲线表明：

①在一定温度(pH)范围内，随温度(pH)的升高，酶的催化作用 ，超过这一范围，酶的催化作用 。

② 都会使酶失活，而低温只是 ，酶分子结构 ，温度升高 恢复活性。

(2)从丙图可以看出：反应溶液pH的变化 酶作用的最适温度。 4、底物浓度和酶浓度对酶促反应的影响

(1)甲图：在其他条件适宜、酶量一定的情况下，酶促反应速率随底物浓度增加而加快，但当底物达到一定浓度后，受 限制，酶促反应速率不再增加。

(2)乙图：在底物充足，其他条件适宜的情况下，酶促反应速率与酶浓度成 。 当堂达标

1、下列有关酶的叙述，正确的是 ( )

A．所有酶都含有肽键，用双缩脲试剂进行检验可以呈现颜色反应

B．酶催化的专一性表现在它能催化一种化合物或一类化合物的化学反应 C．酶催化反应产物对酶的活性不具有调节作用

D．酶分子结构在高温、低温、过酸、过碱条件下均会受到破坏而使酶失去活性

2、取经过编号的5支试管分别加入2 mL0.5 mol/L的过氧化氢溶液进行如下试验，根据实验内容，下列说法正确的是 ( )

A.说明酶具有高效性的是3号和4号试管

酶的曲线讲解篇六：2013酶坐标曲线归纳及实验

《酶》坐标曲线题的归纳

班级1、温度对酶催化效率的影响

例1、右图表示某有机物加入某种酶后在0℃～80℃的环境中，有机物的分解总量与温度的关系图。依图判断，在0℃～80℃环境中，酶的活性变化曲线（其它条件适宜）正确的是（ ）

例2、

下图中能正确表示胰蛋白酶对底物的分解速度和温度关系的是（ ）

例3、图甲表示温度对淀粉酶活性的影响；图乙是将一定量的淀粉酶和足量的淀粉混合后，麦芽糖积累量随温度变化的情况。下列说法中不正确的是 （ ）

A．To表示淀粉酶催化反应的最适温度

B．图甲中，Ta、Tb时淀粉酶催化效率都很低，但对酶活性的影响有本质的区别 C．图乙中Tb到Tc的曲线表明随温度的升高，麦芽糖的积累量不再上升，表明酶的活性已达到最大

D．图乙中A点对应的温度为To 2、酸碱度对酶催化效率的影响

例4、一份装有人体唾液淀粉酶的溶液，其pH值由2调整到7，再由7调整地2的过程中，其酶的催化活性变化是（ ）

例5、下图分别表示温度、pH与酶活性的关系，叙述不正确的是 （ ）

A.曲线A上的b点所对应的温度表示该酶的最适温度 B.人体内胃蛋白酶的活性与曲线B相似

C.曲线B、C说明不同的酶有不同的最适pH值 D.酶活性随温度的升高而增强

3、反应物浓度和酶浓度对酶催化效率的影响

例6、下图纵轴为酶反应速度，横轴为底物浓度，其中正确表示酶量增加1倍时，底物浓度和反应速度关系的是（ ）

例7、下图实线表示联苯水解酶催化的反应速率与酶浓度的关系，虚线表示在其他条件不变的情况下，底物浓度增加一倍，反应速度与酶浓度的关系，能正

确表示两者关系的是（ ）。

1．下图所示中的A、B、C三图依次表示酶的浓度一定时，反应速度和反应物浓度、温度、pH的关系.请根据图回答下列问题：

（1）图A中．反应物达到某一浓度时，反应速度不再上升，其原因是：__________ （2）图B中，a点所对应的温度称___________

（3）图B中，a点到b点曲线急剧下降，其原因是____________

（4）将装有酶与反应物的甲、乙两试管分别放入12℃和75℃水浴锅中，20分钟后取出转入37℃的水浴锅中保温，两试管内反应分别为：甲______________；乙____________.

（5）图C表示了______________催化反应的速率变化曲线。

A. 唾液淀粉酶 B. 胃蛋白酶 C. 胰蛋白酶 D. 植物淀粉酶 2．请你解读与酶有关的图示、曲线：

(2)图3是与酶活性影响因素相关的曲线，请分析回答：

当pH从5上升到7，酶活性的变化过程是____________；从图示曲线我们还可以得出的结论是____ __.

(3)图4和图5是底物浓度和酶浓度对酶促反应的影响曲线，请分析回答：

图4中A点后酶促反应的速率不再增加，其限制性因素主要是______。从图5可以得出的结论是：在底物足量条件下，___ __。

酶的相关实验题

1、某同学为了探究pH对人唾液淀粉酶活性的影响，设计了如下实验步骤： ①在A、B、C、D、E5支使观众分别加入pH5.0、6.0、7.0、8.0、9.0的适宜浓度缓冲液5ml，再分别加入质量分数为1%的淀粉液1ml。 ②各试管中分别加入适当浓度的唾液稀释液1ml，摇匀。 ③将5支试管放入70℃恒温水浴中，保温时间相同且合适。 ④取出各试管，分别加入斐林试剂2ml，摇匀。

⑤观察各试管溶液的颜色，通过颜色深浅判断唾液淀粉酶作用的最适pH。 上述实验步骤中有2处错误，请更正并说明更正的理由（不考虑试剂的浓度和加入量、pH梯度以及实验重复次数），以便实验能得到正确的预期结果。 （1） 。 （2） 。 2、甲、乙、丙三位同学，围绕酶的特性，设计了如下实验，请运用你所学的知识，指出三位同学实验设计中存在的问题并提出修正方案。 示例：某同学做唾液淀粉酶水解淀粉的实验：取一支试管，先加入2mL淀粉糊，然后再加入1mL唾液，放在水温37℃的烧杯内，一段时间后，向试管内滴加2滴碘液，结果不变蓝，说明唾液淀粉酶能够水解淀粉。

（缺乏对照，应再取1支试管，加入1mL清水代替唾液，基余条件都相同，起对照作用）

（1）甲同学探究酶的高效性：取一支试管，加入2mLH2O2，再加2滴新鲜土豆研磨液，观察到产生大量气泡，用带火星的卫生香检测，卫生香猛烈燃烧，说

明酶的催化作用具有高效性。 （2）乙同学探究不同的酶其所需的pH条件不同：①取12支试管并编号1~12，各加入2mL蛋清液，调节各试管的pH，分别等于1~12；②同时向12支试管内加入胃蛋白酶和胰蛋白酶；③放在37℃左右的大烧杯内一段时间；④用双缩脲试剂检验试管中的蛋白质存在情况。

（3）丙同学探究温度影响酶的活性：①取6支试管编号，A，A1、B，B1、C，C1。在6支试管中都加入等量的淀粉溶液和等量淀粉酶溶液。②A，A1试管放放60℃水中，B，B1试管放入100℃水中，C，C1试管放入冰水中，维持5分钟。③取出后各加入等量的碘液，观察

基础考察

1、下列有关酶的叙述，正确的是（ ） ①是有分泌功能的细胞产生的

②有的从食物中获得，有的从体内转化而来 ③凡是活细胞都能产生酶 ④绝大多数酶是蛋白质

⑤有的酶是蛋白质，有的是固醇 ⑥酶在代谢中有多种功能

⑦在新陈代谢和生殖发育中起调控作用 ⑧酶只是起催化作用 ⑨酶只在细胞内发挥作用

A.①②⑤ B.③⑦⑨ C.③④⑧ D.④⑤⑥

酶的曲线讲解篇七：酶作用的各种曲线

酶的曲线讲解篇八：酶的坐标曲线

酶的坐标曲线题

1.右图甲表示某有机物加入某种酶后在0℃-80℃环境中，有机物的分解总量与温度的关系图，依图判断，在0℃—80℃环境中，酶的活性变

化曲线(pH适宜)正确的是

A B C D

2.下图中能正确表示胰蛋白酶对底物的分解速度和温度关系的是

A B C D

A B C D

3.下图纵轴为酶反应速度，横轴为底物浓度，其中正确表示酶量增加1倍时，底物浓度和反应速度关系的是

A B C D

4、一份装有人体唾液淀粉酶的溶液，其pH值由2调整到7，再由7调整地2的过程中，其酶的催化活性变化是（ ）

5、动物脑组织中含有丰富的谷氨酸脱羧酸，能专一催化1mol谷氨酸分解为1molr－氨基丁酸和1molCO2。某科研小组从小鼠的脑中得到该酶后，在谷氨酸起始浓度为10mmol/L、最适温度、最适pH值的条件下，对该酶的催化反应过程进行研究，结果见图1和图2。

图1产物CO2：浓度随时间变化曲线图 图2酶催化反应速率随酶浓度变化曲线

（注：酶浓度固定） （注：反应物浓度过量）

请根据以上实验结果，回答下列问题：

（1）在图1画出反应过程中谷氨酸浓度随时间变化的曲线（请用“1”标注）。

（2）当一开始时，将混合物中谷氨酸脱羧酸的浓度增加50%或降低反应温度10℃，请在图1中分别画出理想条件下CO2 浓度随时间变化的曲线（请用“2”标注酶浓度增加后的变化曲线，用"3”标注温度降低后的变化曲线），并分别说明原因。

（3）重金属离子能与谷氨酸脱羧酸按比例牢固结合，不可解离，迅速使酶失活。在反应物浓度过量的条件下，向反应混合物中加入一定量的重金属离子后，请在图2中画出酶催化反应速率随酶浓度变化的曲线（请用“4”标注），并说明其原因。

酶的曲线讲解篇九：酶工程实验讲义

实验一 酵母蔗糖酶的提取

一、原理

酵母中含有丰富的蔗糖酶(EC.3.2.1.26)，本实验以酵母为原料，通过超声波破碎细胞、硫酸铵沉淀等步骤，分离纯化酵母蔗糖酶。

二、实验材料、仪器和试剂

1.材料 活性干酵母 2.仪器

(1)高速离心机 (2)恒温水浴锅 (3)超声破碎仪 3.试剂

(1)1 mol/L醋酸溶液

三、操作步骤

1.破碎细胞

取5 g干酵母，加5 g石英砂，置于预先冷却的研钵中，加30 mL去离子水，研磨30 min，在冰箱中冰冻约10 min（研磨液面上刚出现冰结为宜），重复2次。将研磨液转移至大离心管中，12000 r/min离心15 min，弃去沉淀。 2.加热除杂蛋白

将上清液转入三角瓶，用1 mol/L醋酸溶液逐滴加入，调其pH值至5.0，然后迅速放入50℃的水浴中，保温30 min。在温育过程中，注意经常缓慢搅拌液体。之后在冰浴中迅速冷却之，以12000 r/min的转速离心20 min，弃去沉淀。留0.5 mL上清液为第二组分。 3.乙醇沉淀

量出上清液的体积，加入等体积的95%冷乙醇溶液(预先放在-20℃低温下的时间不少于30 min)，于冰浴中温和搅拌20 min。然后以12000 r/min的转速离心25 min，小心弃去上清液，沉淀沥干。将沉淀溶解在6 mL 0.05 mol/L Tris-HCl缓冲液(pH值7.3)中，搅拌(5 min以上)使其完全溶解，以12000 r/min的转速离

心25 min，取出0.5 mL上清液作为第三组分，剩余部分(乙醇抽提液)进行第4步操作。

用尿糖试纸进行半定量测定：

在白瓷板每孔中分别滴3滴待测酶液，再加3滴含5％蔗糖的pH 4.6的醋酸缓冲液，搅匀，37℃放置10 min，浸入尿糖试纸，1 s后取出，60 s后比较颜色的深浅，与比色卡对照。

尿糖试纸的原理：

尿糖试纸是将葡萄糖氧化酶和过氧化氢酶及无色的化合物固定在纸条上，制成的测试尿糖含量的酶试纸。溶液（或尿液）中的葡萄糖在葡萄糖氧化酶的催化作用下，形成葡萄糖酸和过氧化氢；过氧化氢在过氧化氢酶的催化作用下形成水和原子氧；原子氧可将某种无色的化合物氧化成有色的化合物。当这种酶试纸与溶液（或尿液）相遇时，很快就会因溶液（或尿液）中葡萄糖含量的由少到多而依次呈现出浅蓝、浅绿、棕或深棕色。尿糖试纸是固定化酶实际应用的范例之一。

四、结果分析

以梯度洗脱出的管数为横坐标，以吸光度A280、酶活、NaCl浓度为纵坐标，绘出层析曲线和酶活曲线图。

实验二 蔗糖酶酶学性质的研究

1 pH对蔗糖酶活动性的影响

酶的生物学特性之一是它对酸碱度的敏感性，pH对酶的活性的影响极为显

著，通常各种酶只在一定的pH范围内才表现出活性，同一种酶在不同的pH值下所表现的活性不同，其表现活性最高时的pH值称为酶的最适pH。在进行酶学研究时一般都要制作一条pH与酶活性的关系曲线，即保持其它条件恒定，在不同pH条件下测定酶促反应速度，以pH值为横座标，反应速度为纵座标作图。由此曲线，不仅可以了解反应速度随pH值变化的情况，而且可以求得酶的最适PH。

酶溶液pH值之所以会影响酶的活性，很可能是因为它改变了酶活性部位有关基团的解离状态，而酶只有处于一种特殊的解离形式时才具有活性，例如：

H H

＋－

EH2 ＋

EH E pKa1 (有活性) pKa2

＋

＋

酶的活性部位有关基团的解离形式如果发生变化，都将使酶转入“无活性”

状态。在最适pH时，酶分子上活性基团的解离状态最适合于酶与底物的作用。此外，缓冲系统的离子性质和离子强度也会对酶的催化反应产生影响。 蔗糖酶有两组离子化活性基团，它们均影响酶水解蔗糖的能力。其解离常数分别是 pKa =7和pKa =3。 实验方法：

按下表配制7种缓冲溶液（公用）：

将两种缓冲试剂混合后总体积均为10ml，其溶液pH值以酸度计测量值为准。

2. 准备二组各7支试管，第一组7支试管每支都加入0.2ml上表中相应的缓冲液，然后加入一定量的蔗糖酶（此时的蔗糖酶只能用H2O稀释，酶的稀释倍数和加入量要选择适当，以便在当时的实验条件下能得到0.6~1.0的光吸收值（A650）。另一组7支试管也是每支都加入0.2ml上表中相应的缓冲液，但不再加酶而加入等量的去离子水，分别作为测定时的空白对照管。所有的试管都用水补足到0.8ml。

3. 所有的试管按一定时间间隔加入0.2ml蔗糖（0.2mol/L)开始反应，反应10min后分别加入1 mL 1 mol/L NaOH终止酶促反应，加水杨酸试剂1ml，沸水浴精确反应5 min,冷却后定容至25 mL，然后测定A540的吸光值。

4. 画出不同pH下蔗糖酶活性（moles/min）与pH的关系曲线，注意画出pH值相同，而离子不同的两点，观察不同离子对酶活性的影响。 2 温度对酶活性的影响

对温度的敏感性是酶的又一个重要特性。温度对酶的作用具有双重影响，一

方面温度升高会加速酶反应速度；另一方面又会加速酶蛋白的变性速度，因此，在较低的温度范围内，酶反应速度随温度升高而增大，但是超过一定温度后，反应速度反而下降。酶反应速度达到最大时的温度称为酶反应的最适温度。如果保持其它反应条件恒定，在一系列不同的温度下测定酶活力，即可得到温度～酶活性曲线，并得到酶反应的最适温度。最适温度不是一个恒定的数值，它与反应条件有关。例如反应时间延长，最适温度将降低。大多数酶在60℃以上变性失活，个别的酶可以耐100℃左右的高温。 实验方法：

本实验要测定0℃～100℃，之间7个不同温度下蔗糖酶催化和酸催化的反应速度。这7个温度是：30℃、40℃、50℃、60℃、70℃、80℃、90℃。 每个温度准备1支试管，以乙酸缓冲液作为缓冲液。

1. 确定酶的稀释倍数，试管中加入0.2ml 0.2mol/L pH4.9的乙酸缓冲液，0.2ml稀释的酶，加水至0.8ml 加入0.2ml 0.2mol/L的蔗糖开始计时，在室温下反应10min，后分别加入1 mL 1 mol/L NaOH终止酶促反应，加水杨酸试剂1ml，沸水浴精确反应5 min,冷却后定容至25 mL，然后测定A540的吸光值。 须得到0.2～1.0A的吸光度，准备一个水的空白对照管用于测定所有的样品管。

2. 测定上列各个温度下的反应速度，每次用1支试管，均加入0.2ml乙酸缓冲液均用水调至0.8ml，放入水浴温度下使反应物平衡30秒，加入0.2mol/L蔗糖0.2ml，准确反应10分钟，后分别加入1 mL 1 mol/L NaOH终止酶促反应，加水杨酸试剂1ml，沸水浴精确反应5 min,冷却后定容至25 mL，然后测定A540的吸光值。记录每个水浴的准确温度。

3. 酶催化的各管A540 值均进行酸催化的校正。画出酶催化的反应速度对温度的关系曲线。

酶的曲线讲解篇十：第8讲 酶和ATP

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